生物化学：04章核苷酸和核酸2.pptVIP

三、DNA的熔解温度（melting temprature Tm） DNA在加热变性时，紫外吸收增加值达总增加值一半时（双螺旋结构失去一半时？）的温度称为该DNA的变性温度，也称熔点或熔解温度，用Tm 表示。DNA的Tm值一般在 82—95 度之间，每种DNA都有一个特征性的Tm值。 解链曲线 如果在连续加热DNA的过程中以温度对A260值作图，所得的曲线称为解链曲线。 影响Tm值的因素 DNA的均一性：均质DNA Tm值范围较窄，异质DNA Tm值的范围较宽 DNA中G-C对的含量 经验式: (G+C)%=(Tm-69.3)×2.44 盐离子强度：离子强度低的介质中，Tm 值较低范围较宽；离子强度较高的介质中，Tm 值较高，范围较窄。（DNA在含盐缓冲液中保存） G-C含量对Tm值的影响 肺炎球菌 盐浓度对Tm值的影响 * 5’端形成特殊的帽子结构（m7G5’ppp5’NmpNp--），确切功能还不十分清楚，推测它能在翻译过程中起识别作用以及对mRNA起稳定作用。 RNAi是在研究秀丽新小杆线虫（C. elegans）反义RNA（antisense RNA）的过程中发现的，由dsRNA介导的同源RNA降解过程。1995年，Guo等发现注射正义RNA（sense RNA）和反义RNA均能有效并特异性地抑制秀丽新小杆线虫par-1基因的表达，该结果不能使用反义RNA技术的理论做出合理解释。直到1998年，Fire等证实Guo等发现的正义RNA抑制同源基因表达的现象是由于体外转录制备的RNA中污染了微量dsRNA而引发，并将这一现象命名为RNAi。　　此后dsRNA介导的RNAi现象陆续发现于真菌、果蝇、拟南芥、锥虫、水螅、涡虫、斑马鱼等多种真核生物中，并逐渐证实植物中的转录后基因沉默（posttranscriptional gene silencing，PTGS）、共抑制（cosuppression）及RNA介导的病毒抗性、真菌的抑制（quelling）现象均属于RNAi在不同物种的表现形式。　　1999年，Hamilton等首次在PTGS植株中发现了长度为25nt的RNA中间产物。2000年，Zamore和Hammond等使用体外培养的果蝇细胞进行研究发现，外源性dsRNA通过耗能过程降解成21-23nt的小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）引发RNAi。　　2000年，Wianny和Svoboda等分别证实在小鼠胚胎细胞和卵母细胞中dsRNA能引发RNAi效应。2001年，Elbashir等证实21nt的siRNA可在避免激活dsRNA依赖的蛋白激酶(dsRNA-dependent protein kinase，PKR)和2,5-寡聚腺苷酸合成酶(2,5-oligoadenylate synthetase，2,5-OAS)信号转导途径的同时，有效抑制人胚肾293细胞、Hela细胞等哺乳动物细胞中目的基因的表达。　　2002年，Brummelkamp等首次使用小鼠H1启动子构建了小发卡RNA（small hairpin RNA，shRNA）表达载体pSUPER，并证实转染该载体可有效、特异性地剔除哺乳动物细胞内目的基因的表达，为利用RNAi技术进行基因治疗研究奠定了基础。 * * 离子强度低的介质中，Tm 值较低 范围较宽；离子强度较高的介质中，Tm 值较高，范围较窄。 目 录 第五节 RNA的种类和结构 一、RNA的结构 RNA分子中核苷酸之间的连接方式：3′，5′-磷酸二酯键 RNA分子构象的多样性 二、信使RNA 信使RNA（messenger RNA ， mRNA） :蛋白质合成的模板，携带一个或几个基因信息到核糖体上指导蛋白质的合成。 DNA mRNA 蛋白 转录 翻译 原核细胞 细胞质 细胞核 DNA 内含子 外显子 转录 转录后剪接 转运 mRNA hnRNA 翻译 蛋白 真核细胞 大多数真核mRNA的5′末端均在转录后加上一个7-甲基鸟苷，同时第一个核苷酸的C′2亦甲基化，形成帽子结构。 大多数真核mRNA的3′末端有一个多聚腺苷酸(polyA)结构，称为多聚A尾。 编码区和非编码区 mRNA结构特点 甲基化(m7G5’ppp5’NmpNp--) 碱 基 5’,5’-三磷酸酯键 间或甲基化 三、转移RNA 转移RNA（transfer RNA, tRNA）: 按照mRNA的信息，准确地将相应的氨基酸转运至核糖体，参加蛋白质的合成。 tRNA一般含有73-94核苷酸，单链 2