2020第七章细菌和噬菌体的重组和连锁.pptVIP

如何检出某一基因的重组子 ? ? 把中断杂交的细菌放在完全培养基上培养，显然供体、 受体菌都能生长。影响检测。我们只需要把发生重组的 重组子检出。这就必须有一个可供选择用的供体标记基 因。这样可以认出重组子，如在基本培养基中培养选择 thr + leu + 重组子。这时 thr + leu + 为标记基因，可排除受体 菌株，但供体菌还能继续存在。为了不选择供体细胞本 身，供体细菌也应该带有一个特殊的标记，能使自己不 被选择。例如供体菌对链霉素敏感，这样当结合体在含 有链霉素的培养基上生长时，供体菌株就被杀死了。 ? 把中断杂交的细菌稀释接种到含有链霉素的 基本培养基上，如能形成菌落，它的基因型 + + r 必定是 thr leu str 。因为只有这种重组子才 + + 能生长。并说明供体 thr 和 leu 已进入受体 并发生重组。我们称在供体菌中被选择的基 因 thr + 和 leu + 为 选择标记基因 ，而始终不被 s 选择的 str 为 反选择标记基因 ，而那些还没 有进行选择检定的基因为 非选择标记 。 在发生重组的菌落中，如何检别非选择标记基因 ? 对每一时刻的重组 thr + leu + str r 的菌落影印培 + 养接种到不同的培养基上（如乳糖 lae + 伊 红 + 美兰 → 红色，反之则是粉红色的。 ? 记录重组子中每一非选择标记出现的时间、 出现的频率和持续时间，得图（ Hfr 的非选 - 择标记基因进入 F 所需的时间，以及根据非 选择标记在各个时间出现的频率作图）。 ? Wollman 和 Jacob 对重组子 + + r thr leu str 进行 菌落影印培养实 验。分析 Hfr 染 色体上其它非选 择性标记基因进 － 入 F 细菌的顺序 和所需时间（分 钟），绘制连锁 图。 各培养基分别具有不同的营养缺陷或 某种抑制性物质存在。 （ 2 ） . 实验结果及分析 9 ? 从 Hfr 菌株某基因在 F － 细菌中出现开始，随 着时间的推移，具有该 基因的菌落逐渐增加， 直到某一百分数为止。 ? 而且某一基因出现的时间 愈早，它达到的频率愈高。 ? 如叠氮化钠抗性基因出现 最早，在 24 分钟时就达到大 约 90 ％的 F - 菌落；半乳糖发 酵基因出现最迟，即使在混 和后 60 分钟也只有 30 ％的菌 落属于能利用型。 （ 3 ） . 结论 染 色 体 从 一 端 开 始 ， （ 这 一端称为原点（ origin ）或 O ）， 以线性方式进入 F - 细胞中。基因 离原点越远，进入 F － 细胞越迟。 离开原点较远的基因，可能在转 移过程停止以前，仍未转移，因 而 斜 率 较 低 ， 达 到 的 最 高 值 也 － 较小。如果让 Hfr × F 杂交继续进 行 ， 长 达 二 小 时 ， 然 后 使 之 中 － 断，这样发现某些 F 受体转变为 Hfr 。致育因子是最后转移到受体 的，并使它们成为供体其效率很 低，是因为致育因子是线性染色 － 体最后一个单位，它最晚进入 F 细胞。 （ 4 ） . 作图 Wollman 和 Jacob 认为，根据中断杂交技术，用杂交 后 Hfr 基因最初在受体细菌中出现的时间作为指标，可 以作连锁图。 – 遗传距离用时间（分钟）为单位，譬如， ton 在 azi － 开始进入 F 细胞后 2 分钟进入，那么 azi 和 ton 间的遗 传距离为 2 单位，其它依此类推。 ? 细菌的交换过程 重组子 ( 即重组类型 ) 的产生是由于不同的 DNA 分子之间发生交换的结果。细菌重组子的产生是由 于细菌染色体（ F - 染色体）与供体 DNA 分子（部分 Hfr 染色体）之间发生交换的结果。但发生单交换 是没有用的，只有发生偶数的交换才能产生有活性 的重组子。 根据重组子频率来确定两基因之间的距离并绘 制出连锁图，这种根据重组频率作图的方法称之为 重组作图。 图示：细菌基因的交换 A a b B + a b 部分二 倍体 A a B b B a A B b a A B b A Hfr lac + ade + (str s ) × F - lac - ade - (str r ) 实验方法： 将重组子菌落影印培养在 加有曙红和美蓝的培养基 上：以检验能否利用乳