食用菌液体发酵罐制种技术.pdf

食用菌液体发酵罐制种技术 食用菌制种主要有液体和固体两种制种方式。液体制种是目前国 际上通用的、先进的方法。液体菌种具有生产周期短、用工成本低、菌 丝活力强、接种后萌发吃料快、菌种在培养基中的流动性和分散性好、 菌龄一致、出菇整齐、可缩短栽培时间等优点。在对液体制种与固体 制种经济效益分析比较中指出，液体菌种发育时间可以减少 24d，接 栽培袋菌丝满菌时间缩短 10d，污染率可以降低 1.5%，成本利润率 可提高 42%。液体菌种作为食用菌基料工厂化生产发展过程中的重要 环节，具有重要意义。而现在食用菌产业受资金和技术的限制，其规 模化、工厂化生产仍然以固体菌种为主，液体菌种的应用只有少数较 大规模工厂化生产的企业及少数栽培品种工厂化栽培中获得应用，液 体菌种的优势完全没有发挥出来。液体菌种在制作过程中对设备、技 术的要求较高，液体菌种发酵罐的操作技术流程复杂，增加了使用者 的生产难度。我们将对食用菌液体菌种发酵罐的生产工艺、操作流程 进行技术总结，为食用菌项目的液体菌种提供参考。 1、研发液体菌种发酵罐的构造 液体菌种在发酵培养过程中需要充足的氧气，属好氧性发酵。满 足于好氧性发酵的生化反应器主要有两大类即机械搅拌通风发酵罐 和气流搅拌发酵罐。前者利用通风装置和搅拌装置将氧溶入发酵液中， 因机械搅拌剪切力而对菌丝产生破坏作用，因此不适于栽培型菌种的 1 应用。而后者则利用外部供气装置将气体通入发酵罐内形成环流将氧 溶入发酵液中，其特点是基质溶液分布均匀、具有较高的溶解氧速率 和溶解氧效率、结构简单、易于加工和操作。而气流搅拌发酵罐的构造 主要由电控系统、气体输送系统、发酵培养系统三部分组成。 1.1 电控系统。由控制箱体、微型电脑、集成传感器、报警器、数 码显示屏、控制开关等组成，可调控灭菌温度、时间、压力及培养温度 等。 1.2 气体输送系统。由无油隔膜泵、气水分离器、空气过滤器、滤 芯、止回阀、压力表、硅胶管等组成，可为发酵罐提供纯净、无菌的气 源。 1.3 发酵培养系统。由发酵罐体、鼓泡器、加热管、进气阀、接种 阀、冷却水进出孔、压力表、安全阀、排气阀、接种孔、视镜等组成，液 体菌种的灭菌、接种、发酵培养都在发酵罐体内完成。 2、食用菌栽培一级种子的制备 适宜的生长条件对发酵结果很重要，发酵必须用生长良好的种子 进行接种。一级种子的培养通常是在摇瓶中进行，所使用的 2L 三角 瓶中种子培养基的装量为 500mL。二级种子可在发酵罐中培养。其生 产工艺流程如下：试管母种→试管母种扩繁→一级种子摇瓶培养→二 级种子发酵罐培养→液体菌种转接栽培袋。 2.1 母种准备。食用菌母种通常在 PDA 或改良的 PDA 斜面培养 2 基上生长良好。长期冰箱保存的母种必须在新鲜的培养基上转接，活 化后才能作为液体培养的种子。也可用当年栽培的子实体进行组织分 离，可获得纯度高、菌丝健壮、生命力强、色泽纯正的母种。 2.2 摇瓶菌种准备。母种培养好后再转接入 500~1000mL 的三角 瓶中扩大培养。摇瓶菌种可用配方马铃薯 200g，葡萄糖 20g，酵母膏 2g， 蛋 白胨 3g， 磷 酸 二氢钾 2g， 硫 酸镁 1g， 维 生 素 B11 粒 ， 水 1000mL，pH 自然。每瓶可装200~300mL 培养基在 0.13~0.15MPa 压力、 121℃条件下，灭菌 40min。在无菌条件下接种到三角瓶内，置于摇床 上振荡培养，摇床振荡频率为 80~100r/min，温度控制在 24~26℃，培 养 4~6d 即可。 3、食用菌二级种子发酵培养 罐的清洗与检查→培养基制作→上料→培养基灭菌→降温→发酵 罐接种培养→栽培袋接种。 3.1 发酵罐的清洗和检查。一是新购的发酵罐或是使用过的发酵 罐，在生产前都必须对罐内进行彻底清洗。清除罐壁上菌球、菌块、菌 皮、料液及其它污垢，用清水冲刷干净。二是检查各个阀门、加热管、 电控系统、气泵、压力表等是否正常，如有故障及时排除。 3.2 煮罐空消。新罐初次使用、上一罐污染、更换生产品种或罐长 时间放置重新使用时，须对罐体内部进行彻底消毒。方法是加水至视 镜中线，扣紧接种盖，关闭排气阀，打开启动开关，当温度达到 100℃