临七病毒学病毒的诊断及防治原则.pptVIP

武汉大学基础医学院 临床七年制《病原生物学》 4 PRINCIPLES OF LABORATORY DIAGNOSIS, TREATMENT AND PREVENTION OF VIRAL INFECTION 2020/3/19 1 Section 1 病毒感染的检查 ? ? ? ? ? 标本的采集与送检 病毒的分离与鉴定 病毒的分离、培养 病毒的鉴定 病毒的定量 ? ? ? ? 病毒感染的诊断 形态学检查 病毒成分检测 病毒感染的血清学诊断 标本的采集 ? 样本采集的时间： 发病初期与恢复期的双份血清 病程 潜伏期 前驱症状期 病毒成分 不常检出 可能检出 多可检出 特异性抗体 无 无 偶尔检出 ? 部位： 血液、脑脊液 呼吸道、胃肠道、泌尿生殖道、 创口、皮肤等 发病期 急性期 恢复期 痊愈期 可以检出 难以检出 不能检出 多可检出 可以检出 可以检出 标本的保存与送检 ? 加抗生素 ? 低温保存 ? 快速送检 病毒的分离培养与鉴定 ? ? ? 不常用于临床诊断；常用于流行病学调查与进化研究等 病毒分离培养可： 接种动物 ? ? 接种鸡胚 接种细胞 病毒样本接种动物 ? ? ? ? ? ? ? 应用于接种病毒的动物： 大 / 小鼠 兔 狗 猪 猴 。。。 病毒样本接种鸡胚 ? 不同病毒接种于鸡胚不同部位 ? 绒毛尿囊膜 ? 尿囊腔 ? 羊膜腔 ? 卵黄囊 病毒样本接种细胞 ? 原代细胞与传代细胞 ? ? CPE ： Cytopathic Effect 细胞聚集成团、肿大、圆缩、脱落、细胞融合成多核细胞及细胞内出现 包涵体 ，乃 至细胞裂解 病毒的鉴定 ? ? ? 形态学鉴定 — 电镜 血清学鉴定 — 已知抗体结合病毒抗原，确定 血清型 病毒核酸的鉴定 — 测序确定 基因型 病毒的定量 ? ? ? TCID 50 ：半数组织细胞感染量 PFU ：空斑形成单位（ PFU/ml ） MOI ：感染复数（ ~ pfu number/cell ） 病毒的定量 ? ? 血凝试验 血凝抑制试验 病毒感染的诊断 ? ? ? 检测病毒成分 病毒蛋白、抗原的检测 病毒核酸的检测 （包括但≠基因组检测） ? ? ? ? 方法： 血清学诊断 特异性 IgM 与 IgG 检测 血凝抑制试验 中和试验（少用） 方法： 免疫荧光（ FIA ）、 ELISA 、 W.B 、 PCR （ RT- PCR ）、核酸杂交、基因芯片、基因 测序 …… FIA 、 ELISA 、 ELISA ? enzyme linked immunosorbent assay ? 双抗夹心法检测抗原 ? 可定性，亦可定量 ? 也可以包被抗原，检测抗体 PCR ? Polymerase Chain Reaction ? PCR 可定性 ? 荧光定量 PCR 可定量 ? 可检测病毒基因组，或转录产物 病毒实验室检测类型 - 病毒实验室诊断方法 检测抗体 / 抗原 ELISA/HI/P A 蛋白印迹 免疫荧光 每种方法各有优 势 , 依据病毒来定 检测策略 中和试验 检测病毒 蛋白芯片 病毒分离 电镜 ELISA 免疫荧光 检测核酸 New molecular tools for epidemiology studies and diagnosis 实时荧光定量 PCR 套式 PCR 基因芯片 Section 2 病毒感染的防、治 防：人工主动免疫 ? 灭活疫苗 ? 减毒活疫苗 ? 亚单位疫苗 ? 合成肽疫苗 ? 基因工程疫苗 ? DNA 疫苗 ? 载体疫苗 防：人工被动免疫 ? 天然被动免疫 ? 人工被动免疫 ? 丙种免疫球蛋白 ? 细胞因子 IFN ， IL 等 治：抗病毒化学药物 碘苷 IDU 阿昔洛韦 ACV 阿糖腺苷 Ara-A 齐多夫定 AZT 双脱氧肌苷 DDI 拉米夫定 利巴韦林 奈韦拉平 疱疹 疱疹 疱疹、 HBV HIV HIV HIV 、 HBV 病毒挫，流感等 HIV 核苷类似物与非核苷类似物 （视频） 蛋白酶抑制剂 金刚烷胺 HIV 流感