临床免疫检验技术 第八单元 两对半检测 乙肝两对半检测.ppt

* 3．注意事项 采用固相捕获法检测IgM类抗体时要注意的是RF（IgM类）及其它非特异IgM的干扰。RF（IgM类）能与固相抗人μ链抗体结合，并可与随后加入的酶标抗体（动物IgG）反应，从而导致假阳性反应。 * 四、 酶联免疫吸附试验的应用和注意事项 一、 应用 1．病原体及其抗体测定 广泛应用于传染病的诊断。 2．蛋白质测定 各种免疫球蛋白、补体组分、肿瘤标志物各种血浆蛋白质、同工酶等。 3．非肽类激素测定 如T3、T4、雌激素、绒毛膜促性腺激素、黄体素、胰岛素、皮质醇、促甲状腺素等。 4．药物和毒品测定 如地高辛、苯巴比妥、庆大霉素、吗啡等。 * 注意事项 1．加样 应力求准确，并注意不可溅出和产生气泡。 2．温育 注意反应的温度和时间应按规定的要求，整块反应板的温度应一致，以防止“边缘效应” 。 3．洗涤 手工洗板是在每次温育后，将反应液吸出或甩干，然后用缓冲液洗涤2或3次，拍干。使用洗板机洗涤次数要适当增加。 4．显色 根据试剂盒说明操作即可。 5．比色 要注意波长的选择。操作中应注意避免出现滤光片错用的问题。 * HBsAg的检测 1 加样：将预包被板条固定于板架。加入25?L样品稀释液于反应孔中。每次试验设阴性对照3孔、阳性对照2孔，加阴、阳性对照75?L；设空白对照1孔，不加样品。其余孔加入待测样品75?L，振荡混匀。 2 温育：置37℃温育60分钟。 3 加酶：空白对照孔不加酶标记物，其余孔加入酶标记物50?L，振荡混匀。 4 温育：置37℃温育30分钟。 * HBsAg的检测 5 洗涤：弃去孔内液体，将稀释后的洗液注满各孔，静置30～60秒，弃去孔内洗液。重复洗6次后拍干。 6 显色：每孔加入底物缓冲液50?L，再加入底物液50?L，振荡混匀，置37℃温育30分钟。 7 终止：每孔加入终止液50?L，轻拍混匀。 8 读值：用酶标仪读值，在单波长450nm（须以空白对照孔调零）或双波长450nm/630nm下读取各孔A值。 * HBsAb的检测 1 加样：将预包被板条固定于板架。每次试验设阴性对照3孔、阳性对照2孔，分别加阴、阳性对照50?L；设空白对照1孔，不加样品。其余孔加入待测样品50?L。 2加酶：对照孔不加酶标记物，其余孔加入酶标记物50?L，振荡混匀。 3 温育：置37℃温育30分钟。 4洗涤：弃去孔内液体，将稀释后的洗液注满各孔，静置30～60秒，弃去孔内洗液。重复洗6次后拍干。 5显色：每孔加入底物缓冲液50?L，再加入底物液50?L，振荡混匀，置37℃温育15分钟。 6终止：每孔加入终止液50?L，轻拍混匀。 7读值：用酶标仪读值，在单波长450nm（建议用双波长读值，参考波长630nm）下，用空白孔校零，再读取各孔A值。 * HBeAg的检测 1 加样：将预包被板条固定于板架。每次试验设阴性对照3孔、阳性对照2孔，分别加阴、阳性对照50?L；设空白对照1孔，不加样品。其余孔加入待测样品50?L。 2加酶：空白对照孔不加酶标记物，其余孔加入酶标记物50?L，振荡混匀。 3 温育：置37℃温育30分钟。 4洗涤：弃去孔内液体，将稀释后的洗液注满各孔，静置30～60秒，弃去孔内洗液。重复洗6次后拍干。 5显色：每孔加入底物缓冲液50?L，再加入底物液50?L，振荡混匀，置37℃温育15分钟。 6终止：每孔加入终止液50?L，轻拍混匀。 7读值：用酶标仪读值，在单波长450nm（建议用双波长读值，参考波长630nm）下，用空白孔校零，再读取各孔A值。 * HBeAb的检测 1 加样：将预包被板条固定于板架。每次试验设阴性对照3孔、阳性对照2孔，分别加阴、阳性对照50?L；设空白对照1孔，不加样品。其余孔加入待测样品50?L。 2加酶：空白对照孔不加酶标记物，其余孔加入酶标记物50?L，振荡混匀。 3 温育：置37℃温育30分钟。 4洗涤：弃去孔内液体，将稀释后的洗液注满各孔，静置30～60秒，弃去孔内洗液。重复洗6次后拍干。 5显色：每孔加入底物缓冲液50?L，再加入底物液50?L，振荡混匀，置37℃温育15分钟。 6终止：每孔加入终止液50?L，轻拍混匀。 7读值：用酶标仪读值，在单波长450nm（建议用双波长读值，参考波长630nm）下，用空白孔校零，再读取各孔A值。 * HBcAb的检测 1 样品准备：血清（血浆）用稀释后的洗液作1:30稀释（检测结果为临床意义）；血清（血浆）原倍加样（检测结果为流行病学意义）。 2 加样：将预包被板条固定于板架。每次试验设阴性对照3孔、阳性对照2孔，分别加阴、阳性对照50?L；设空白对照1孔，不加样品。其余孔加入待测样品50?L。 3加酶：空白对照孔不加酶标记物，其余孔加入酶标记物50?L，振荡混匀。 4 温育：置37℃温