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富碘聚合物囊泡高效装载紫杉醇和多烯紫杉醇 摘要：目前中国人的肿瘤发病率和死亡率居高不下。肿瘤早期诊断和精准的肿瘤治疗是降低肿瘤致死率的有效途径。对抗癌纳米药物的研究已很丰富，也有一些品种应用到临床。但是由于恶性肿瘤的异质性，准确筛查到分子水平并非易事，筛查后如何对肿瘤患者实现精准靶向治疗也存在巨大挑战。因此，选择合适的纳米载体是研发出高效靶向抗癌纳米药物的关键之一。同时，目前纳米载体存在生物相容性、稳定性、响应性、载药量等问题;对于纳米药物的体内行为也缺少有效的监测。本实验室研发了 CT 可视、还原敏感可逆交联的富碘囊泡纳米药物用于实现肺癌的 CT 筛选、精准靶向治疗和疗效评估。本论文就该大课题中紫杉醇类抗癌药物载药量低的问题展开研究。我们制备了富碘囊泡纳米囊泡载体，它是基于嵌段聚合物聚乙二醇-b-聚(碘代碳酸酯 -co-二硫戊环碳酸酯)(PEG-b-P(IC-co-DTC))。其中，PIC 可以提供纳米囊泡在体内 的示踪功能，PDTC 可以提供可逆交联的性质，使纳米囊泡更加稳定，并且赋予其细胞内还原环境下的响应性。该囊泡在自组装形成时通过疏水作用力装载紫杉醇(PTX) 和多烯紫杉醇(DTX)。本文对此纳米囊泡载两种药的各种条件进行探索和优化，用 DLS 测定纳米囊泡粒径和粒径分布、用高效液相色谱(HPLC)测定载药量，用 MTT 实验表征了其细胞毒性;并且研究了该载药纳米囊泡的冻干粉的制备和CT 造影情况。构建出的较良好的载药纳米囊泡模型，为后续的细胞实验和动物实验提供了基础。 关键词：纳米囊泡，CT 成像，紫杉醇，多烯紫杉醇，抗肿瘤治疗 作者：吴承运指导老师：孟凤华 教授 第一章 前言 1.1 CT 成像技术与造影剂 癌症是现代社会的黑死病，其高发病率和高致死率使得人心惶惶，也让人类社会造成沉重的负担。由于癌症在发病初期没有明显的征兆，因此在诊断出患有癌症时，往往癌细胞已经从患病部位进行转移，增加了治疗难度，或是肿瘤已经大面积生长并使得患病器官坏死，这俗称癌症晚期或癌症末期，晚期的患者从确诊到生命的尽头往往是痛苦不堪的，对于癌症的治疗，最有效率的方法是预防和早期检测。然而如何实现癌症的早期诊断，一直是科学界和医学界所关注的重大课题。肿瘤早期诊断和精准的肿瘤筛检是降低人类患癌致死的有效方法。但由于恶性肿瘤的异质性，即每个患者从肿瘤的恶性程度、肿瘤新生血管情况、肿瘤组织基质、转移情况、癌细胞类型到癌细胞表面受体的表达程度等各不相同，因此准确筛检到分子水平并非易事，筛检后如何对癌症患者实现精准靶向治疗也存在巨大挑战。 对于癌症的诊断，现今临床上常用 X 射线断层扫描(CT)技术[1]，CT 造影效率高，花费较少，并可与其它成像系统(如 PET、SPECT 等)联用，提供高分辨率的 3D 组织结构图，且可在感兴趣区域多次迭加增强信号。然而，由于软组织的 CT 值通常较低(0-50 Hu)，对软组织间(包含肿瘤)的微小差别的分辨较差。为了增强软组织的 CT成像，须使用外源性 CT 造影剂。其中碘造影剂已有近百年的历史[2]， 临床上的使用的造影剂分为离子型和非离子型，但由于 CT 成像需要大量的造影剂，高渗透压就成了很大的问题，从而离子型造影剂的用途产生了局限性，然而采用非离子型造影剂， 虽然人体上有较好的耐受性，可降低不良反应的风险，但其拥有较高的粘度，会产生一定的副作用，并且容易被肾脏快速清除，因此成像时间窗口短。[3,4]为了解决这些缺点，科学家们发展出纳米尺度的碘造影剂，如胶束、聚合物、脂质体、金属螯合物等造影剂。 1.2 高效碘代造影剂 为了改善小分子碘造影剂的这些使用上的局限性，科学家们逐渐开展出纳米尺度的碘造影剂，例如：胶束，脂质体，聚合物和纳米囊泡等造影剂[5-9]。除了碘以外，也 有纳米粒子基于一些重原子，例如金，铋和稀土元素[10-12]，可用于更高效的 CT 造影剂。然而，其成本造价和生物相容性，阻碍了其进一步发展和临床转化。碘胶束纳米乳液可在高于临界胶束浓度时自组装而成，能稳定延长循环时间，静脉注射高浓度胶束，则胶束会因为血液的稀释而分解为单体，降低使用效率。碘聚合物造影剂中由长PEG 和疏水基团的 AB 型两亲性共聚物很受欢迎，因为其低的 CMC 值，高稳定性和小的尺寸而备受瞩目。含碘树枝状造影剂由于其制作难度高和高成本限制了其更进一步的应用。含碘脂质体造影剂其脂双层的特殊结构可包载亲疏水药物[13]，是商业化的小动物造影剂，近期用 PEG 修饰的脂质体来增加其循环时间可用作血液的微型CT 造影，含碘的脂质体与游离碘在体内的循环时间有很大的不同，游离碘复合物容易被肾清除，而碘复合物的脂质体可以很慢的被网状内皮系统