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实验五 白细胞分类计数（ DC） 教学目的 ：掌握血涂片制备的操作要领、瑞氏染色方法、正常外周血五种白细胞形态特点、 白细胞分类技术 教学重点 ：血涂片制备的操作要领、瑞氏染色方法、正常外周血五种白细胞形态特点教学内容 【原理】 将血液制成血涂片，用瑞氏染液染色，根据各种白细胞形态特征分类计数 100 个白细胞，即可求出各种白细胞的相对比值（百分率）。 【器材】 1．显微镜 2．采血用具 3．载玻片、推片、蜡笔 4．分类计数器 【试剂】 1．瑞氏染液或瑞氏 - 姬姆萨染液 2． PH6.4 - 6.8 磷酸盐缓冲液 【操作】 1．血片制作：（示教） （ 1）良好涂片标准： １ ) 呈头 、 体、尾舌 形２ ) 血膜厚薄适宜 ３ ) 两边留有空隙 （ 2）涂片好 坏与下列因素有关 ： 1）血 滴大小 2）推片 与玻片 之间角度 3）推片 速度 2．染色 （ 1）染色方法： 用蜡笔 在血膜两头划线 ，将血片 平放在 染色 架，上 瑞氏染液 3～ 5 滴染１分钟 ， 加等 量缓冲液 混匀 染５～１０ 分钟，流水 冲去染液， 干燥后油 镜检查 。（ 2）染色 结果判断 ： 1）正常：外 观呈粉红 色；镜下红 细胞染 粉红 色，可 见有碟状感 白细胞 浆中 的 颗粒能 显 示各种细胞的特 有色彩；核 染紫红 色，染色 质清楚 ，粗 细松紧 可辨。 2） 偏酸： 红细胞 和嗜 酸性颗粒偏红 ，白细胞 核呈浅兰 色或 不着 色。 太酸则只 见一片红 染，白细胞 除嗜酸性颗粒 外， 均不着 色。 3） 偏碱：细胞 呈灰兰色，白细胞 颗粒 深暗 ，嗜酸性颗粒 变成 暗褐 色， 甚至黑 色。 中性 颗粒 也偏粗偏 碱（紫黑 色），血片 过厚的地 方呈绿 色。 3．分类方法： （ 1） 低倍 镜观察：选择 细胞分 布均 匀、染色好的 部位  转油镜下计数 100～ 200 个白 细胞 , 求出各种白细胞 所占 百分比。（ 2）细胞分 布 : 头体 部以淋巴 细胞 较多 尾部和两 侧以 中性粒 、单核细胞 较多 , 片尾部 , 异常、 大的细胞 较多 . 一般选择 片头至片 尾的 2/3 区域 计数 较好 , 即体尾 交界处 , 按一定 方式 , 有规律 的移动视野。 4．外周血正常白细胞形态：（ 图略 ） 【注意事项 】： （ 1） 未干透血膜，染色 时易脱落 ，故血膜应干透再 染色。 （ 2）冲 洗前 ，先在低倍 镜下观 察有核 细胞 是否 着色， 否则适 当延长 染色 时间 。 （ 3）染液 不能 过少 ，以防 蒸发 ，染 料沉 着在 血膜上不 易冲掉， 影响 观察。 （ 4） 以流水 冲去染液， 防染料沉 着 。 （ 5）染色 应注意保存 血片 尾部，不能 用蜡笔 划去 ，因体 积大的细胞常 在此出现。 （ 6）有 时病人 白细胞 极少 （一张 片 100 个 WBC），可数 50 个细胞， 再算 出百分数， 同 时应注明 ，或数 2 张片子 ，并注明 。 （ 7） 发现 幼稚 或异常白细胞， 应分类 报告 ，包括 在分类百分率 中。 （ 8） 如遇到 不能 确认 的细胞， 应另列入分类 不明一项 ，如实报告 ， 并保留血片。 （ 9） 发现 有核红 细胞， 应报告 分类 100 个白细胞 所见有核红 细胞数。（ 10）按一定 顺序 移动视野 。 （ 11）白细胞 总数 × 各种白细胞的百分率，即 得各种白细胞的 绝对值。 【方法 学评价 】 显微镜法白细胞分类 是经典 、 传统 的血细胞分类方法 目前还无任何仪 器可 以取代 。 【参考 值】 DC： Nst 1 ％～5％ Nsg 50 ％～70％ E 0.5 ％～ 5％ B 0 ％～ 1％ L 20 ％～ 40％ M 3 ％～ 8％ 【思考题 】 1．嗜 酸性粒 细胞 和嗜 碱性粒 细胞形态 区别是什么？ 2．白细胞 核不着 色可 能是因为操作 中那种误差引起 的？