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金诃牌雪益康胶囊急性毒性和遗传毒性试验研究 刘有菊 马文俊 袁发荣 孙跃宁 陈海莲 摘要：目的：研究金诃牌雪益康胶囊的急性毒性和遗传毒性实验，评价其食用安全性。方法：依据《食品安全性毒理学评价程序和方法》进行急性毒性试验、遗传毒性试验（Ames 试验、骨髓细胞微核试验和精子畸形试验）。结果：小鼠急性毒性试验经口最大耐受剂量（MTD）30 g/kg·bw，属无毒级。Ames 实验、骨髓细胞微核试验和精子畸形试验结果均为阴性，表明受试物无致突变作用。结论：金诃牌雪益康胶囊急性毒理分级属无毒级，无遗传毒性，在本试验剂量范围内，金诃牌雪益康胶囊属于安全性保健食品。 关键词：金诃牌雪益康胶囊； 急性毒性； 遗传毒性； 金诃牌雪益康胶囊产品配方精选海拔3000米左右高原特色草本植物唐古特白刺果、柴达木枸杞果、沙棘果等为主要原料制成的保健食品。优越的地理环境，日照时间长，太阳辐射强，昼夜温差大，培育出高活性的高原物质。以传统医学与现代养生理论为指导原则，六种植物科学配伍、合理配比，采用传统炮制与现代工艺相结合的技术手段，精制而成的一款高端产品，其主要保健功能是调节血糖。 为评价产品的安全性，根据《保健食品检验与评价技术规范》的要求，现进行金诃牌雪益康胶囊的急性毒性及遗传毒性试验。 1. 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 受试样品 金诃牌雪益康胶囊由金诃藏药股份有限公司提供。样品推荐量为每日3次，每次3-4粒，0.3g/粒，总量为3.6g，相当于成人推荐量0.06g/kg·bw（以60kg计）。 1.1.2 实验动物和饲养环境 KM种小鼠，清洁级，体重18-22g，动物合格证号：青医动字第001号，由青海省实验动物中心提供； 实验动物购进后首先于恒温恒湿的动物房环境中适应3天，单笼饲养。 1.1.3 菌株 鼠伤寒沙门氏菌TA97a、TA98、TA100 、TA102。由上海市疾病预防控制中心提供。 1.1.4 主要儀器 超净工作台、电子天平、压力蒸汽灭菌器、HH-6数显恒温水浴锅（常州澳华仪器有限公司）、培养箱、恒温电热鼓风干燥箱。 1.2 方法 1.2.1 急性毒性试验 按最大耐受量试验方法进行，取健康KM种小鼠40只，体重18-22g/只，雌雄各半。于正式试验前晚禁食不禁水16h，次日，用经过三次预试后确定的30g/kg剂量，经口灌胃给药后，观察两周，记录小鼠中毒表现、死亡情况。 1.2.2 Ames试验 试验按照平板掺入法，经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四株菌株进行试验； 受试样品设5个剂量组：8、40、200、1000、5000ug/皿，同时设立自发回变组、溶剂对照组和阳性对照组。按《保健食品检验与评价技术规范》（20XX 年版）中鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验中平板掺入法，在保温的45℃ 2mL 顶层培养基中，依次加入0.1mL受试物、0.1mL 菌株增菌液，需活化时加入 0.5mL S9混合液，充分混匀迅速倾倒底层平板，做3个平行平板。37℃培养 48h，计数回变菌落数，试验重复一次。如果受试物的回变菌落数增加超过自发回变菌落数的2倍以上，并具有剂量反应关系者，即为诱变试验阳性。 1.2.3 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验 健康KM种小鼠50只，体重25-30g/只，随机分为5组，雌雄各半，10只/组。根据急性毒性实验LD50值，设3个受试物组（1/2 LD50、1/4 LD50、1/8 LD50）即15.00、7.50、3.75g/（kg·BW）3 个样品剂量组，分别称取金诃牌雪益康胶囊15.00、7.50、3.75g，加蒸馏水20ml溶解待用，另设40mg/（kg·BW）环磷酰胺为阳性对照组、离子水阴性对照组； 给药后各组均间隔24h灌胃0.20ml/10g体重，于末次灌胃给药后6h脱颈椎处死，取双侧股骨，滴加1滴小牛血清，制成细胞悬液，涂片制片，油镜下选择细胞分散好、形态完整、染色良好部位，按一定顺序进行计数。计数嗜多染红细胞（PCE）及带微核的细胞（MNPCE）共1000个，每只小鼠计数微核的千分率。 1.2.4 小鼠精子畸形试验 选25-30g/只健康KM种雄性小鼠50只，随机分为5组，每组10只，给药组按1/2 LD50、1/4 LD50、1/8 LD50，40mg/ kg·bw环磷酰胺阳性对照组、阴性对照组（离子水），各组雄性小鼠按照相应的剂量，分别连续灌胃5d后，喂养观察30d。于第35d处死小鼠，取两侧副睾的精子涂片精子，按规定涂片制成。观察计数各组小鼠