细胞培养从头学.docx

常用设备 准备室的设备： 单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、 储品规（放置消毒过的物品）、包装台。配液室的设备：扭力天平和电子天平 （称量药品）、 PH计（测量培养用液 PH值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。 培养室的设备： 液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-80 C）、 空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。必须放在无菌间的设备： 离心机（收集细胞）、 超净工作台、倒置显微镜、 C02孵箱（孵育培养物）、水浴锅、三氧消毒杀菌机、 4 C冰箱 （放置serum和培养用液）。 无菌操作 无菌室的灭菌： 1、 定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后 用3%o来苏尔或者新洁尔灭或者 0.5 %过氧乙酸擦拭。 2、 CO2孵箱（培养箱）灭菌：先用 3%。新洁尔灭擦拭，然后用 75 %酒精擦拭或者 0. 5%过氧乙酸，再用紫外灯照射 3、 实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各 20-30分钟 4、 实验后灭菌：用75 %酒精（3%。新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物 台。 实验人员的无菌准备： 1、 肥皂洗手。 2、 穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋 3、 用75 %酒精棉球擦净双手。 无菌操作的演示: 1、 凡是带入超净工作台内的酒精、 PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用 75 %酒精 擦拭瓶子的外表面 2、 靠近酒精灯火焰操作。 3、 器皿使用前必须过火灭菌 4、 继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火。 5、 各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。 6、 吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。 器械的清洗和消毒 玻璃器械洗消： 一、新的玻璃器皿的洗消： 1、 自来水刷洗，除去灰尘。 2、 烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入 5%稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、 砷等物。 3、 刷洗、烘干：12小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用 烤箱烘干。 4、 泡酸、清洗：用清洁液（重铬酸钾 120g :浓硫酸200ml :蒸馏水1000ml ）浸泡1 2小时，然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗 15次，最后蒸馏水冲洗 3-5次和用双蒸水过 3次。 5、 烘干、包装：洗干净后先烘干，然后用牛皮纸（油光纸）包装。 6、 高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子，打开开关和安全阀，当蒸气成直 线上升时，关闭安全阀，当指针指向 15磅时，维持20-30分钟。 7、 高压消毒后烘干 、旧的玻璃器皿的洗消: 1、刷洗、烘干：使用过的玻璃器皿可直接泡入来苏尔液或洗涤剂溶液中，泡过来苏尔 溶液（洗涤剂）的器皿要用清水刷洗干净，然后烘干。 2、 泡酸、清洗：烘干后泡入清洁液（酸液）， 12小时后从酸缸内捞出器皿立即用自 来水冲洗（避免蛋白质干涸后粘附于玻璃上难以清洗），再用蒸馏水冲洗 3次。 3、 烘干、包装：洗干净的器皿烘干后取出用牛皮纸（油光纸）等包装，以便于消毒储 存及防止灰尘和再次被污染。 4、 高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内，盖好盖子，打开开关和安全阀，随着温度 的上升安全阀冒出蒸气， 当蒸气成直线冒出3-5分钟后，关闭安全阀，气压表指数随之上升， 当指针指向15磅时，调节电开关维持 20-30分钟即可。（玻璃培养瓶消毒前可将胶帽轻轻 盖上） 5、 烘干备用：因为高压消毒后器皿会被蒸气打湿，所以要放入烤箱内烘干备用。金属 器械洗消： 金属器皿不能泡酸，洗消时可先用洗涤剂刷洗，后用自来水冲干净，然后用 75 %酒精 擦拭，再用自来水，然后用蒸馏水冲洗， 再烘干或空气中晾干。 放入铝制盒内包装好在高压 锅内15磅高压（30分钟）消毒，再烘干备用。 橡胶和塑料： 橡胶和制品通常处理方法是： 先用洗涤剂洗刷干净， 再分别用自来水和蒸馏水冲干净， 再用烤箱烘干，然后根据不同品质进行如下的处理程序： 1、针式滤器帽不能泡酸液，用NaOH泡6-12小时，或者煮沸20分钟,在包装之前要装 好滤膜两张，安装滤膜时注意光面朝上 （凹向上），然后将螺旋稍微拧松一些，放入铝盒中在 高压锅内15磅30分钟消毒，再烘干备用。注意在超净台内取出使用时应该立即将螺旋旋 2、 胶塞烘干后用2 %氢氧化钠溶液煮沸 30分钟（用过的胶塞只要用沸水处理 30分钟）, 自来水洗净，烘干。然后再泡入盐酸液 30分钟，再用自来水，蒸馏水，三蒸水洗净，烘干。 最后装入铝盒内高压消毒，烘干备用。 3、 胶帽，离心管帽烘干后只能在 2 %氢氧化钠溶液中浸泡 6-12小时（切记时间不能 过长），自来水洗净，烘干。然后再泡入盐酸液 30分钟，再用自来水，