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实验一 细胞的形态观察及其大小测量 【实验目的】 1、 通过对原核和真核备种形态细胞的光学显微镜观察，了解细胞的形态及H?显微结构; 2、 学习显微测量的方法，对细胞的大小有一肓观认识。 【实验用品】 普通光学显微镜汨镜测微尺僦台测微尺;载玻片;盖玻片等。 【实验材料】 人肝细胞切片;鸡血红细胞;蚕豆叶片横切片湃葱。 【实验内容和方法】 （一）细胞形态观察 1、 动物细胞的观察 （1） 鼠肝细胞切片：在显微镜下仔细观察肝细胞的形态构造。注意肝细胞Z间的界限、 细胞的形状、细胞核的形状和数最、核仁的形状和数最、细胞质的形态构造以及细胞质和细 胞核染色的区别。 （2） 鸡血细胞涂片的观察：注意观察血细胞的纟R成；红细胞、白细胞、血小板的形态 特点。 2、 植物细胞的观察 （1） 取蚕豆叶片横切片的观察：注意表皮细胞和叶肉细胞的基木结构。 （2） 洋葱表皮细胞的形态观察：用银了?撕取洋葱表皮，滴一滴蒸僧水，盖上盖玻片。 在显微镜下观察的形态和结构。 （二）细胞的大小和测量 1、测微尺的使用 目镜测微尺是一块圆形玻片，屮心刻有一尺，长5~10mm,分成50~100格。每格的 实际长度因不同物镜的放大率和不同镜筒长度而异。镜台测微尺是在一块载玻片中央，用树 胶封固一圆形的测微尺，长1mm或2mm,分成100格或200格，每格的实际长度0.01 mrn（ 10 um）o当用目镜测微尺来测量细胞的大小时，必须先用镜台测微尺核实目镜测微尺毎一格 的长度。方法如下： ⑴卸下目镜的上透镜，将目镜测微尺刻度向下装在忖镜的焦平瓯上，再旋上目镜的上透 午兒° （2） 将镜台测微尺刻度向上放在镜台上夹好，使测微尺分度位于视野屮央。调焦至能看清 镜台测微尺的分度。 （3） 小心移动镜台测微尺和转动目镜测微尺（如忖镜测微尺分度模糊，可转动目镜上透镜 进行调焦），使两尺左边的一直线重合，然后由左向右找出两尺另一次重合的育线（如图所示）。 记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。按下式计算目镜测微尺每格等 于多少U m： 测定目镜测微尺每格实长的图解 上尺：目镜测微尺；下尺：镜台测微尺 镜台测微尺的格数 目镜测微尺每格的微米数二 X10 目镜测微尺的格数 例如，图屮镜台测微尺1格二目镜测微尺6格，代入公式得: 目镜测微尺每格=4 /6X10U m=l. 66 nm ⑸取下镜台测微尺，换上需要测量的玻片标木，用H镜测微尺测量标木。 2、计算：根据测量结果计算各种细胞及细胞核的体积。 椭球形：v=4 n ab2 椭球形：v=4 n ab2 / 3 圆球形：V=4/3“3 圆柱形：V= Ji r2h a ?长半径b ■短半径 I?■半径「■半径 h ■高 【作业与思考】 1、 血细胞分为哪几大类？分别描述你看到的不同血细胞的形态，并阐述其功能。绘图。 2、 任意选择你所看到的动物细胞和植物细胞各一个，绘图并进行适当标注，测量其大 小，并比较动植物细胞大小的羌异。 3、 在不同的放大倍数下，所测得的细胞大小一致吗？你认为在哪个放大倍数下测定得 比较准确？为什么？ 实验二PEG法诱导细胞融合 【实验目的】 了解细胞融合的原理和过程； 初步掌握利用PEG介导动物细胞融介的实验技术。 【实验原理】 细胞融合，即在自然条件下或利用人工法（生物的、物理的、化学的），使两个或两个 以上的细胞合并成一个具有双核或多核细胞的过程。由于不仅同种细胞可以融合，种间远缘 细胞也能融合，萇至于动植细胞也能合二为一，因此细胞融合技术目前较广泛皿用于细胞生 物学、遗传学和医学研究等各个领域，并且取得显著的成绩。 化学融合方法一般使用聚乙二醇（PEG）诱导细胞在体外进行融合。商品PEG的相对分了质 量有200-6000范围内的各种规格，它们均可用作细胞融合剂。普遍认为PEG分了能改变各 类细胞的膜结构，使两细胞接触点处质膜的脂类分了发生疏散和重组，由于两细胞接口处双 分了层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用，从而使细胞发生融合。促进细胞融介的效 力，必须采用较高浓度的PEG溶液，但在高浓度PEG溶液下，细胞可能因脱水而受到显著的 破坏。因此，选择合适的PEG分了量，浓度及作用时间是PEG融合技术的关键。该方法的优 点是：操作简单，容易获得融合体，融合效果好。 细胞融合率是指在显微镜的一个视野内，已发生融合的细胞核总数与该视野内所有细胞 （包括已融合的细胞）的细胞核总数Z比，通常以百分比表示。 器材：离心机、显微镜、天平、水浴锅、滴管、5ml离心管、烧杯、盖玻片、载玻片。 材料：鸡血悬液。 试剂: 1） 0.85%的生理盐水； 2） GKN 液：8.0g NaCl, 0.4g KC1, 1.77g Na2HPO4.2H2O, 0.69g NaH2PO4.2H2O, 2.0 g葡萄糖,0.0