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实验一 显微镜的使用及微生物形态的观察 一、实验目的 1、 掌握光学显微镜的结构、原理，学习显微镜的操作方法和保养。 2、 观察细菌、放线菌和芽抱细菌的个体形态，学会生物图的绘制。 —、实验原理 （一） 显微镜的构成：镜筒、H镜、转换器、载物台、镜臂、调节器、集光器、反光镜 （二） 显微镜使用和保护 1、 低倍镜的使用 2、 高倍镜的使用 3、 油镜的使用 4、 显微镜的保护 三、 教学重点与难点 教学重层 显葢镜的构成，显微镜使用和保护。 教学难点：显微镜使用和保护。 四、 实验学时数和学时分配 实验学时数：2学时 学时分配：1、检杏学生实验预习情况一5分钟；2、教师讲解木次实验内容一30分钟；3、学生 分工协作开始实验一40分钟；4、学生讨论，处理实验结果一20分钟；5、教师对木次实验情况进行 点评，布置下次实验内容一25分钟。 五、 实验准备 生物显微境、载玻片、盖玻片、擦镜纸、微生物标木。试剂（略） 六、 实验过程 1、 低倍镜观察 2、 高倍镜观察 3、 汕镜观察 4、 用油镜观察各种菌类 七、 思考题 使用汕镜前为什么要先用低倍和高倍镜检杏？ 实验二 培养基的配制和灭菌 一、 实验目的 1、 熟悉玻璃器肌的包扎方法。 2、 掌握培养基的制备方法。 3、 掌握高压蒸汽灭菌技术。 二、 实验原理 培养基是微生物生长繁殖和积累代谢产物的营养基质。通常根据微生物生长繁殖所需要的各种 营养物配制而成。其屮含水分、碳化合物、氮化合物、无机盐和生长因了等，这些营养物可提供微 生物碳源、能源、氯源等，组成细胞及调节代谢活动。按培养目的不同，或微生物种类不同可配成 各种培养基。不同微生物对pH值要求不一样，所以配制培养基时，还应根据不同微生物对pH值的 要求将培养基调到合适的pH值范围。 三、 教学重点与难点 教学重筈:掌金暑通光学显微镜的结构和样品制作和明视野普通光学显微镜屮汕镜的正确使用 方法；教学难点:理解干燥系与油浸系的不同，显微镜的数值口径与其放大效能和分辨力的关系。 四、 实验学时数和学时分配 实验学时数：2学时 学时分配：1、检杏学生实验预习情况一5分钟；2、教师讲解木次实验内容一30分钟；3、学生 分工协作开始实验一40分钟；4、学生讨论，处理实验结果一20分钟；5、教师对木次实验情况进行 点评，布置下次实验内容一25分钟。 五、 实验准备 器材：pH试纸、培养川1.、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、童筒、培养基分装器、高压蒸汽灭菌 锅、酒精灯、纱布、棉花、牛皮纸（或报纸）、玻璃棒、天平、牛角匙、记号笔。试剂（略） 六、 实验过程 1、 玻璃器川［的洗涤和包装 2、 培养基的制备 3、 灭菌 七、 思考题 1、 培养基是根据什么原理配制的？ 2、 为什么湿热灭菌比干热灭菌优越？ 实验三微生物的染色 一、 实验目的 1、 学习微生物的染色原理、染色的基木操作技术 2、 掌握微生物的一般染色法和革兰氏染色法。 二、 实验原理 微生物（尤其是细菌）的机体是无色透明的，在显微镜下，由于光源是白然光，使微生物体与其 背景反差小，不易看清微生物的形态和结构，若增加其反差，微生物的形态就可看得清楚。通常用 染料将菌体染上颜色以增加反差，便于观察。 微生物细胞是由蛋白质、核酸等两性电解质及其他化合物组成的，所以，微生物细胞表现出两 性电解质的性质。两性电解质兼有碱性基和酸性基，在酸性溶液中离解出碱性基呈碱性带正电。在 碱性溶液屮离解出酸性基呈酸性带负电。经测定，细菌等电点在pH = 2?5之间，故细菌在屮性（pH = 7）、碱性（pH7）或偏酸性（pH = 6-7）的溶液屮，细菌的等电点均低于上述溶液的pH值，所以细 菌带负电荷，容易与带正电荷的碱性染料结合，故用碱性染料染色的为多。碱性染料有美蓝、甲基 紫、结晶紫、龙胆紫、碱性品红、中性红、孔雀绿和蕃红等。 微生物体内备结构与染料结合力不同。故可用各种染料分别染微生物的各结构以便观察。 革兰氏染色法是细菌学屮很重要的一种鉴别染色法。它可将细菌区别为革兰氏阳性菌和 革兰氏阴性菌两大类。它的染色步骤如下：先用草酸馁结晶紫染色，经碘一碘化钾（媒染剂）处理示 用乙醉脱色，最后用蕃红液复染。如果细菌能保持草酸谖结晶紫与碘的复合物而不被乙醉脱色，呈 紫色者叫革兰氏阳性菌。被乙醉脱色用蕃红液复染后呈红色者为革兰氏阴性菌。 三、 教学重点与难点 —教学重筲：革￡氏染色的方法以及微生物染色的原理。 教学难点:革兰氏染色屮操作环节。 四、 实验学时数和学时分配 实验学时数：2学时 学时分配：1、检杏学生实验预习情况一5分钟；2、教师讲解木次实验内容一30分钟；3、学生 分工协作开始实验一40分钟；4、学生讨论，处理实验结果一20分钟；5、教师对木次实验情况进行 点评，布置下次实验内容一25分钟。 五、 实