实验一果蝇型态和生活史观察.docVIP

实验一、果蝇的形态和生活史(设计型实验)观察 一?实验原理： 果蝇(Fruit fly)为双翅目昆虫，全世界约有4000种左右，其屮，黑蝮果蝇(Drosophila melanogaster)由于容易 饲养、繁殖力强、世代周期短以及众多的突变性状，成为遗传学研究的极好材料和超级模式生物，为遗传学 和分了生物学的发展作出了巨大的贡献，推动了人类基因结构和功能的研究。 实验目的： 掌握培养果蝇的基木程序； 了解果蝇生活史屮各个阶段的发育时间及形态特征； 区别黑腹果蝇几种常见突变型的主要性状； 观察不同果蝇种类的生活史。 实验器具： 完成这个实验所需的仪器、用品和试剂： 解剖镜培养瓶 粘贴标签麻醉瓶装有乙瞇的滴瓶滴管解剂针或毛刷70%的酒精 实验材料： 黑腹果蝇(Drosophila melano^aster)野生型(红眼、灰身、长翅、肓刚毛)；未知果蝇1；未知果蝇2;未知 果蝇3;未知果蝇4 实验方法及步骤: I.培养基的配制： li前，已经发展了多种果蝇的培养基。可能使用最简单方便的是“快速培养基”只需加水就可以配成 可使用的培养基，不需加热，不过，一些工作者建议加5滴5%的丙酸以防霉菌，尽管方便，但大量使用 时会显得非常昂贵。 Demerec和kanfmann的果蝇指南有一些不同的培养基配方，另一个有用的培养基要归功于加利福利 亚技术研究所的C.B .Bridges，它的配料如下: 20g琼脂 200g玉米粉 145ml蔗糖汁(KaroSynap)或红糖 145ml 糖密(Brer Rabbit Molasses ) 2400ml蒸懈水 4.5g Dowicil-200 溶于 15ml 蒸馄水 方案1 首先加热溶解琼脂于1000ml蒸僧水屮，然后再加入1000ml蒸镭水。小心地将混合液加热到沸腾。 在加玉米粉之前，先将玉米粉溶于400ml未加热的蒸镭水屮(这样做可以防止玉米粉在热的琼脂悬液 屮形成团块)。加玉米糊到混合液屮，搅拌阻上培养基凝结，然后加入蔗糖汁和糖密，加热15分钟， 融解Dowicil-200GF 15ml蒸僭水中，然后将其加入到主混合液中搅拌均匀。不要让玉米粉沉淀。 将培养基倒入于净的玻璃瓶。这些瓶了可以是各种型号的，但以4盎司的广口瓶和半磅的牛奶瓶 为佳。将培养基转移到大烧杯屮，这样便于倒液。毎支瓶了大约盛装1英寸深的培养基。注意不要让 培养基贴着瓶颈流入。在培养基屮插入消毒过的吸水纸，使用的纸大约1英寸宽，插入后确保低于瓶 颈0.5英寸。这为幼虫化蛹提供了一个干燥的场所。用纱布包裹的棉花作瓶塞，也可以用泡沫數料作 瓶塞。 瓶了塞好后，在高压灭菌锅屮20镑压力消毒20分钟。其它处理果蝇的用品也可同时消毒。 加热后冷却时，水蒸汽会在瓶内冷凝。为了使水分蒸发，应将试剂瓶置放在通风良好的房问48 小时。在放入果蝇前，M先加入少量干燥的酵母菌，这种酵母会成长作为果蝇幼虫的食物。 方案2 先将苯甲酸溶入5ml 95%酒精屮溶解备用，同时取适量水将玉米粉调成糊状放置；将琼脂放入总 量1/4水中加热溶解于60C保温，再将余下的水倒入玉米糊屮加热煮熟，加入红糖煮透倒入琼脂溶液充分 混合，去火，盖上盖闷lOmin,待培养基冷却至60°C时如入苯甲酸，倒入培养瓶（培养瓶事先在12O°C干热灭 菌lh）盖上瓶塞，放置一天后使用。 II.黑腹果蝇的发育及生活史观察 果蝇的卵产在培养基的表面或附近管壁上，孵化一天后，产生微小的白色幼虫，它们以酵母细胞 为食。幼虫要7天的时间长大。然后它们爬到瓶壁上或吸水纸上化蛹。师化3天后，成虫出现。在 25°C,整个生活周期的完成约需10天（图3.1） -X uciybSecond larval molt -X uciyb Second larval molt First larval molt 图 3.1.黑腹果蝇(Drosophila melano^aster)的生活史 in.果蝇处理 麻醉和鉴定成体果蝇，操作如下： 滴几滴乙瞇在麻醉瓶内的吸水纸上。 1、 轻摇培养瓶这样果蝇会掉在瓶底。 2、 移走培养瓶的瓶塞，迅速对准麻醉瓶瓶口，将培养瓶倒转，使果蝇进入麻醉瓶。 3、 在它们停止移动麻再麻醉30秒。如果要进行进一步的杂交实验，注意不要过度麻醉。如果在麻 醉瓶里停留的时间过长，则果蠅会死亡。过度麻醉的果蝇翅膀外展45° （与图3」屮正常休息 状态的翅膀比较） 5、 将果蝇移到干净的瓷板上观察，3X5英寸的瓷板是最好的。 6、 在10X-25X的解剖镜下观测麻醉的果蝇，使用软刷或解剖针去除解剖台周 围的果蝇。 7、 如果实验没有完成，而果蝇复活了，可以滴儿滴乙瞇于玻璃1111里的滤纸上，覆盖在解剖台上果 蝇上，几秒钟后移开。 8、 如果不需要进一步观察，可以丢弃在废料瓶里。麻醉的果蝇若要用于进一步