【国自然】半胱氨酰白三烯受体对水孔蛋白4介导脑水肿的调节(to students).docxVIP

半胱氨酰白三烯受体对水孔蛋白4介导脑水肿的调理 Modulating roles of cysteinyl leukotriene receptors in aquaporin 4-mediated brain edema （国家自然科学基金面上项目） 摘要： 半胱氨酰白三烯及水孔蛋白4（AQP4）是脑水肿重要调理要素，但尚不清楚半胱氨酰白三烯受体（CysLT1和CysLT2）是否经过调理AQP4而影响脑水肿。本项目拟说明CysLT1和CysLT2受体是否能调理脑肿瘤及脑缺血后的AQP4介导的脑水肿。①在脑肿瘤患者的脑样本，调查CysLT1、CysLT2受体和AQP4表达；在原代培育的人脑肿瘤细胞，调查CysLT1和CysLT2受体对AQP4表达及功用的调理。②在大鼠局灶性脑缺血，调查缺血后脑水肿与CysLT1、CysLT2受体和AQP4表达的联系；在原代培育大鼠星形胶质细胞，调查CysLT1和CysLT2受体对AQP4表达及功用的调理。③在原代星形胶质细胞及AQP4转染的C6胶质瘤细胞，开始承认CysLT1和CysLT2受体对AQP4调理进程的信号转导特色。本项目将点评CysLT受体激动剂或拮抗剂对脑水肿的医治价值。 （一）立项依据与研讨内容 1．项意图立项依据 1．脑水肿根本特色 脑水肿是多种病因引起的脑病理改动，根本改动是脑安排水分添加，导致脑安排肿胀，其成果是颅内压增高，危害神经功用，严重者构成脑疝等而危及生命。脑水肿有3种根本类型：血管性、细胞性和渗透压性脑水肿。血管性脑水肿（vasogenic brain edema）是由于血脑屏障通透性增高，导致血浆蛋白渗漏到细胞空隙，构成细胞空隙胶体渗透压增高而导致脑安排肿胀；细胞性脑水肿（cytotoxic brain edema）是由于细胞能量代谢妨碍，导致离子泵（如Na+-K+-ATP酶、Na+-K+-2Cl--同向转运体等）转运功用失调，离子积蓄在细胞内而导致细胞肿胀；渗透压性脑水肿（osmotic brain edema）是由于血浆渗透压低于脑安排渗透压，而构成脑安排肿胀[1]。 尽管引起脑水肿的原因不一样，可是安排间或细胞内外水的转运是构成脑水肿的根本改动，而这种水的转运涉及到细胞的水孔蛋白（又称水通道, aquaporins, AQPs）[2]。 2．水孔蛋白（AQPs）及其与脑水肿的联系 （1）AQPs的一般特色 水孔蛋白是一组转运水的膜蛋白，而水是一切生物体细胞中必需的小分子。1988年，从人的红细胞中第一次确认出分子量28 kDa的膜蛋白，并在非洲爪蟾卵母细胞中表达，这个蛋白被称为水孔蛋白1（AQP1）。迄今为止，在哺乳动物中发现AQPs有 13种亚型：AQP0～AQP12，按功用分红两类：第一类挑选性通透水分子，包含AQP1、AQP2、AQP4、AQP5、AQP8；第二类可通透水分子及甘油等溶质，包含AQP3、AQP7、AQP9、AQP10；此外，AQP0、AQP11和AQP12的通透特性尚不清楚[3]。 AQPs约有270个左右的氨基酸组成，分子量约为30 kDa，有通透水分子的特别构型。例如，AQP1的N-和C-结尾均在细胞内，由6个跨膜区和5个袢（A～E）组成，B和E袢有天冬酰胺-脯氨酸-丙氨酸（NPA）结构，该两个袢在细胞膜构成水孔道，形状类似于“砂漏（hourglass）”；四个AQP1分子组成四聚体结构，其间一个AQP1分子的细胞外部分有一个长的多糖链。AQP4的分子结构与AQP1类似。 脑内有AQP1、3、4、5、8、9六种亚型表达，对AQP1、4、9的表达和功用已有必定的了解。AQP4是现在以为脑内最首要的AQP亚型，人类AQP4基因定坐落18号染色体上，编码的31 kDa蛋白和带N-结尾序列的34 kDa蛋白，这两种异构体在脑中都有表达。AQP4首要散布在脑内星形胶质细胞及其突起，也表达在室管膜细胞以及脑血管内皮细胞，是调理脑内水平衡的一种首要机制。脑内AQP4的杰出特色，是密布表达在包绕脑微血管或蛛网膜的星形胶质细胞足突（end feet）膜上，而在非足突地胞体外表表达较少，与其水平衡调理功用共同[4, 5]。其他两种脑内的AQPs中，AQP1首要表达于脉胳丛的绒毛顶端，能调理脑脊液生成[4]；AQP9（首要表达在肝脏）在脑内首要表达在三类细胞：胶质细胞（如星形胶质细胞、室管膜细胞等）、血管内皮细胞及神经元，其功用较杂乱，处理了水分子外，还能转运甘油和单羟基化合物（如乳酸），或许在脑内能量代谢中发挥作用，将乳酸从胶质细胞转运到神经元[6]。 （2）APQP4与脑水肿 分道扬镳有很多依据标明，脑内AQP4与脑水肿产生有密切联系，其间最典型的是脑肿瘤及脑缺血随同的脑水肿。 A．脑肿瘤 脑水肿是脑肿瘤首要改动之一，其产生首要是由于肿瘤损坏血脑