10 高效毛细管电泳非接触式电导分离检测手性药物对映体.docVIP

SCIENCE IN CHINA Series C Life Sciences 收稿日期: 2000-00-00; 接受日期: 2000-00-00 ***基金(批准号: ***)资助项目 *联系人, E-mail: 高效毛细管电泳/非接触式电导分离检测手性药物对映体 摘要 高效毛细管电泳仪（HPCE）能高效地将手性药物对映体进行分离并测定含量。本实验采用此手段，结合在电泳运行液中添加手性选择剂来构建手性环境，根据电泳工作获得的电泳峰高-迁移时间曲线，分离环氧沙星外消旋体与左旋体得其迁移时间分别为14.43与13.50min，并且测定市售外消旋和左旋氧氟沙星片剂有效成分（左旋氟氧沙星）含量分别为492.2与233.2mg/g, 实验表明，用高效毛细管电泳–非接触式电导检测法测定手性药物对映体具有灵敏度高、分辨率高、重复性好、进样量小、高效快速、易实现自动化等优点。 关键词 毛细管 电泳 手性药物对映体 拆分 测定 刘肖珩等: 稳定剪切流动下黏附于血管表面的白细胞发生变形的生物力学机制 PAGE 5 引言 传统电泳分析的特点为操作烦琐，分离效率低，定量困难，无法与其他分析相比。1981年，Jorgenson和Luckas，用75m内径石英毛细管进行电泳分析，柱效高达40万/m，促进电泳技术发生了根本变革，迅速发展成为崭新的分离分析技术—— 高效毛细管电泳。本实验将学习和掌握手性药物氧氟沙星对映体的HPCE/C4D分离检测技术，了解毛细管电泳分离手性药物对映体的机理，进一步熟悉毛细管电泳仪的基本原理和操作使用。 高效毛细管电泳是以电场中溶质的淌度差异为基础的统指以高压直流电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现高效、快速的新型液相分离分析技术[2]。待测组分在毛细管中的迁移时间是定性的依据，其浓度与电泳峰的峰高（峰面积）的线性关系是定量的依据。 高效毛细管电泳的检测器中，非接触式电导检测（Capacitively Coupled Contactless Conductivity Detection, 简称C4D）是近年来发展起来一种新型的电导检测方法[3]。非接触式电导检测法的电极与待测溶液隔离，避免了因电极与溶液接触而造成的诸多问题，有效地消除了电极中毒的问题，电极寿命长，抗干扰能力强，可检测物质的范围广。HPCE–C4D具有通用性好、灵敏高、分析成本低和环境友好的优点[4]，在日常分析中具有广阔的应用前景。 分子式完全相同，但组成化合物的原子或原子团在空间的取向不同而形成具镜像特征的异构体称之为对映体，又称手性化合物。目前使用的药物大部分是手性化合物，属手性药物。由于生物机体和药物的特异性化学反应与药物的分子结构密切相关，往往一种立体异构体有药效而它的镜像分子却药效很小，甚至具有毒副作用。手性药物的分离分析具有非常重要的意义，已成为分析化学领域最具挑战性的研究课题之一。 毛细管电泳（Capillary Electrophoresis, CE）分离药物对映体的分离机理是，基于在电泳运行液中添加手性选择剂(Chiral Selector, CS)来构建手性环境，在这种环境中二个对映体与手性选择剂之间的相互作用存在差异，这将导致在毛细管中对映体与手性选择剂复合物的电泳淌度发生差别，从而实现对映体的分离。毛细管电泳以其高效、快速、环境友好等特点而成为手性药物拆分中最具吸引力的分析方法。 氧氟沙星（ofloxacin）是一种喹诺酮类广谱抗菌药,其分子中含有手性中心，属手性药物。左旋氧氟沙星的抗菌活性是右旋的约128倍，目前国内市售使用的是其外消旋体和左旋氧氟沙星。本实验采用毛细管电泳-非接触式电导法，以羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)和羟丙基甲基纤维素(HPMC)组成的二元手性选择剂体系，20mmol/L HAc＋6mmol/L NaAc＋12mg/L HPMC＋40mmol/L HP-β-CD为电泳运行液，分离电压＋15kV，对手性药物氧氟沙星对映体进行分离检测。 材料与方法 仪器与试剂 仪器 CES2003毛细管电泳仪（中山大学化学与化学工程学院研制）；熔融石英毛细管（50 cm×50 μm）。超声波清洗器；微量移液器。 试剂 （1）0.2mol·L-1醋酸（HAc）溶液；0.1mol·L-1醋酸钠溶液；羟丙基-β-环糊精固体粉末（HP-β-CD）, 0.5g·L-1羟丙基甲基纤维素（HPMC）。 （2）电泳运行液：取 5 mL 0.2 mol·L-1 HAc溶液、3 mL 0.1 mol·L-1 醋酸钠溶液、2.76g HP-β-CD、1.2 mL 0.5g·L-1 HPMC溶液于50 mL容量瓶中，加超纯水定容至刻度。 （3）样品溶液：取市售外消