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PAGE 2 微波辅助提取-高效液相色谱法测定 蔬果中的维生素C含量 摘要 维生素C是蔬果中重要的营养成分之一。本文通过微波辅助方法萃取处理了橙子、辣椒、番茄与莲雾样品，并采用高效液相色谱－二极管阵列检测器测定样品中的维生素C含量。实验以3% 的乙腈-0.05 mol/L KH2PO4水溶液作为流动相，以维生素C标准系列溶液的色谱峰面积对其浓度做校准曲线，根据样品中维生素C的峰面积，由校准曲线计算其浓度。实验结果表明：橙子样品维生素C含量为18.88mg/100g，辣椒样品维生素C含量为5.42 mg/100g，番茄样品维生素C含量为6.31mg/100g，莲雾样品无法定性、定量分析。 关键词 高效液相色谱（HPLC） 微波辅助萃取 维生素C 1 引言 维生素C（L-ascorbic acid），又称抗坏血酸（AH2)，分子式为C6H8O6，应用广泛，其对人体新陈代谢及生命活动中许多方面具有重要的影响。由于维生素C在体内不能合成，所以必须依靠膳食供给，而水果，蔬菜中维生素C的含量较高的植物有：猕猴桃、青椒、苦瓜等。若缺乏维生素C则会得坏血病、关节疼痛、牙龈出血、发炎、易感染疾病，身体骨骼易损伤且不易愈合。另外，在食品加工中常用作抗氧化剂，酸味剂。可见，维生素C对人类的健康和日常生活有着极其重要的影响，因此，对维生素C的研究得到日益广泛的重视[1-3]。 维生素C的测定方法有很多，各种方法各有特点，常用的滴定法方法简单，但在滴定有色物质时，终点不易判断，维生素C的吸收峰在265nm处，含量的分析本可以使用紫外-可见分光光度法解决，但是由于蔬果中成分较复杂，其它成分有可能会对维生素C的吸收造成直接干扰。而分光光度法操作费时[4]。因此必须更加有效的分离方法以及检测系统。因此我们选取高效液相色谱进行定量与定性分析。，高效液相色谱法是目前发展较快的一种检测方法，其具有高效、快速、稳定、可靠等特点。 本文采用微波辅助技术作样品前处理。微波辅助技术处理样品最突出特点是反应速度极快,节时和节能,产率高,而且环境友好。其中微波辅助提取萃取(MAE)是利用微波与介质的离子和偶极子分子的相互作用，可缩短提取时间、节省试剂、减少污染、提高萃取率等优势,在环境、食品、制药等领域中得到了广泛的应用[5]。 因此本实验采用微波辅助萃取法快速萃取蔬果中的维生素C，采用高效液相色谱进行分析，以维生素C标准系列溶液的色谱峰面积对其浓度做校准曲线，根据样品中维生素C的峰面积，由校准曲线计算其浓度。 2 实验部分 2.1.1 仪器 高效液相色谱仪：LC-2010C（岛津香港有限公司）；微波萃取仪（上海新仪微波化学科技有限公司）； 色谱柱：Phenomenex C18柱 (250 mm×4.6 mm, I.D. 5 μm)；平头进样器。 2.1.2 试剂 乙腈（色谱纯），冰乙酸，维生素C，磷酸二氢钾等均为分析纯；番茄、黄瓜、莲雾等蔬果样品。实验用水为超纯水。维生素C标准溶液：快速准确称取0.025 g 维生素C，用1 mol/L乙酸溶液溶解，定量转移至250 mL容量瓶中，用1 mol/L乙酸溶液定容，得到100 mg/L标准溶液备用，现用现配。 2.1.3色谱条件 流动相：3%的乙腈-0.05 mol/L KH2PO4水溶液（v/v）；流速1 mL/min；紫外检测波长265 nm；自动进样量10 μL。 2.2 实验步骤 2.2.1 样品处理 准确称取切碎的橙子、辣椒、番茄与莲雾样品各5 g，分别以50 mL 1 mol/L乙酸为萃取溶剂萃取，微波功率设为自动，萃取时间为10 min，萃取温度设定为50℃。萃取液过滤后用1mol/L乙酸溶液定容至100 mL，制成供试品溶液。 2.2.2 标准工作曲线的绘制 分别准确移取0.50、2.00、5.00、8.00、10.00 ml 100 mg/L标准溶液于10 ml容量瓶中，用1 mol/L乙酸溶液定容，则得到质量浓度为5，20，50，80，100 mg/L的维生素C样品溶液。待液相色谱仪稳定工作后进样分析。以维生素C色谱峰面积对浓度作图，绘制校准曲线。 2.2.3 定量分析 供试的橙子、辣椒、番茄与莲雾样品溶液经一次性0.45μm微孔滤膜器过滤后注入注射器中，再注入色谱小瓶内，按指定色谱条件进行HPLC分析，记录样品溶液的维生素C色谱峰面积，根据校准曲线计算蔬果样品中维生素C的含量，结果以mg/100g表示。 3 结果与讨论 3.1实验结果 3.1.1标准曲线的绘制 将标准溶液注入色谱小瓶后在液相色谱仪中检测，记录其保留时间与峰面积，见表1： 表1 维生素C标准溶液色谱中的保留时间与峰面积 标准溶液浓度/mg·L-1 保留时间tR/min 峰面积 5 2.738 159434 20 2.743 7