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玉米钾离子高效利用相关基因的遗传转化研究 玉米是我国的主要粮食作物之一， 单产量和总产量的增长速度已超过其它发 展中国家 , 对其进行养分高效利用基因，尤其是钾离子高效利用基因的遗传转化 研究具有重要的理论和实践意义。 玉米茎节转化体系是一个简单， 高效的转化系 统，有着不受季节性及基因型限制的优点。 针对茎节生根过程中不具备正常功能的根的产生、 植株根部在移栽过程中容 易折断等问题， 论文通过优化种子消毒剂及琼脂浓度， 改善植株根部状况， 成功 建立了玉米茎节遗传转化系统， 并对 AlHAK1和 AtCBL9基因进行了遗传转化， 获 得了 T1 代转基因种子。 该体系技术关键为采用 2%次氯酸钠作为消毒剂以及在培 养基中添加浓度为 5g/L 的琼脂。 花粉管通道法为简便易行的遗传转化方法， 通过此方法，实验室前期获得了 AlHAK1，AtCBL9基因的 T5 代花粉管材料， 经 Basta 和 PCR扩增两轮的筛选检测，获得转基因植株 28 株，转 AlHAK1，AtCBL9基因植株的阳性率分别为 15.1%， 3.45%，并获得 T6 代转基因种子。作为该方法的补充和改进，构建了以 AlHAK1 为目的基因的植物线性表达载体，并用花粉管通道法导入到玉米自交系四 -144 基因组，获得 T1 代转基因种子。 为了更加深入的研究茎节再生植株根部表型变化的原因，对其根部进行了 MSAP分析。结果表明：使用升汞与次氯酸钠对种子消毒，均会引起实生苗茎节 及其再生植株根部的甲基化程度发生改变，次氯酸钠对其的影响相对较小。 通过差异片段的比对分析， 从 204 个测序片段中选取了 5 个根部生长发育相 关基因，构建载体， 并对其中三个基因进行了初步的功能验证。 本研究优化了花 粉管通道法和玉米茎节遗传转化系统，成功获得了转基因种子，深入研究表明， 不同的消毒剂会对玉米茎节再生植株根部甲基化水平产生影响， 同时也对筛选出 的部分根部形态相关基因进行了初步的基因功能验证。 以上研究对玉米遗传转化具有重要的理论和应用价值。