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腺相关病毒介导人前脑啡肽原基因在原代培养大鼠神经干
细胞中的表达
华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室,430030 杨辉田玉科王鹏安珂高峰
目的：探讨重组腺相关病毒将0的基因导入神经干细胞的能力和其功 能表达。
方法：1 ?用带有报告基因eGFP的rAAV/eGFP转染体外培养的神经干 细胞，研究其对神经干细胞的感染能力及持续时间，将感染后的神经 干细胞用10%血清诱导分化，观察rAAV病毒感染对细胞分化的影响 及其细胞分化对外源基因表达的影响；将被感染神经干细胞培养传 代 观察rAAV感染对神经干细胞增殖的影响。2.运用rAAV/hPPE将 人前脑啡肽原基因导入神经干细胞，采用RT-PCR,放射免疫法检测 hPPE在神经干细胞中的表达及功能实现。
结果：1. eGFP转染神经干细胞后2即发出强烈荧光，5天出现荧光 表达高峰，能持续2月以上；2. 10%血清诱导神经干细胞可分化为星 形胶质细胞和神经元；分化后eGFP的表达的程度和表达率均未受到 影响（见图1）； 3. rAAV感染神经干细胞后，神经干细胞在一个增殖 周期内的增殖速率未见改变；4.转染rAAV/hPPE 一周后，干细胞 hPPE的表达量及其表达产物L-EK均明显高于未转染细胞 （P0.01）（表 l）o
结论：rAAV能将目的基因整合到神经干细胞并持续而稳定表达，并 且对其生物学特性无明显影响，这种特性使rAAV成为基因治疗疼痛
的重要工具。
图1血清诱导神经干细胞分化对GFP表达的影响（200倍）
A 10%FCS诱导神经干细胞分化后3天B蓝色激发光卜显示分化后细胞仍有大旱 GFF表达C分化后细胞鉴定含MAF2阳性细胞（神经元）D分化后细胞鉴定含有 GFAF*阳性细胞（星形胶质细胞）
表1 细胞培养上清液屮L-EK的含量（T ±S）
组别
份数
亮脑啡肽含量（pg/ml）
原代培养
6
97.34+15.68
转染后一周
6
286.98+23.44*
血清诱导分化后一周
6
304.25+21.73*
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