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益气复脉胶囊中五味子醇甲的含量测定 为控制益气复脉胶囊的质量指标， 笔者建立了益气复脉胶囊 中北五味子主要成分五味子醇甲的反相高效液相色谱法 （RP-HPLC含量测定方法，以有效控制该制剂的质量，为新药 开发提供试验数据。 仪器和试剂 1.1 仪器 SPD-10Avp检测器（日本岛津）、LC-lOATvp高压泵（日本 岛津）、工作站：N2010色谱工作站（浙江大学智能信息工程研 究院）、 UV- 1 700型紫外分光光度计（日本岛津）。 1.2 试剂与用药 乙醚、甲醇（色谱纯）、超纯水、五味子对照品（由中国药 品生物制品检定所提供， 批号： 110857-200405 供含量测定用） 。 益气复脉胶囊：海口奇力制药 XX公司生产。规格：每粒重 0.37g ，批号： 120201。 方法与结果 色谱条件的选择 检测波长的选择 取五味子醇甲对照品适量， 加流动相溶解并稀释制成一定浓 度的溶液。取上述溶液，以流动相为空白，在 200nm^ 400nm范 围内扫描，试验结果表明五味子醇甲在 250nm处附近有最大吸 收。同时，参考中国药典 2005 年版一部五味子药材标准中五味 子醇甲含量测定的检测方法， 拟选用250nm作为本品检测波长的 选择。 流动相的选择 流动相1:甲醇-水=73: 27;检测波长为250nm色谱柱为 Shimadzu VP-ODS （ 150X 4.6mm）（日本岛津），进行检测，结 果五味子醇甲色谱峰的保留时间为 4.399min ，与相邻杂峰的分 离度为 1.177〈1.5，拖尾因子为 1.050，理论塔板数为 3709.82500;试验结果表明色谱条件不能满足含量测定的要求， 因此暂不选用该流动相体系。 流动相2:甲醇-水=65: 35;检测波长为250nm色谱柱为 Shimadzu VP-ODS （150X 4.6mm）（日本岛津），进行检测，结 果五味子醇甲色谱峰的保留时间为 6.886min ，分离度为 5.278 ， 拖尾因子为 0.994 ，理论塔板数为 3001.42500 ;试验结果表明 该色谱条件可满足含量测定的要求， 因此， 决定选用该流动相体 系。 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以 Shimadzu VP-ODS （150X 4.6mm （日本岛津）为色谱柱；流动相为甲醇 -水=65: 35;检测波长为250nm流速：1.0ml/min，柱温：30C。理论 板数按五味子醇甲峰计应不低于 2500，五味子醇甲峰与各其他 成分峰的分离度应符合要求。 2.3 溶剂空白试验 取甲醇 20ul 注入液相色谱仪。试验结果表明溶剂对本品含 量测定无干扰。 2.4 阴性样品试验 按处方工艺自制成不含五味子药材的阴性样品， 同含量测定 项下供试品溶液的制备方法，制备成阴性样品溶液。取 20ul 注 入液相色谱仪。 试验结果表明阴性样品溶液对本品含量测定无干 扰。 2.5 线性关系试验 精密称取于60C真空干燥至恒重的五味子醇甲对照品 5.3mg，置于50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀， 制成母液。分别精密量取上述母液 1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml 置于 10ml 容量瓶中， 加甲醇稀释至刻度。 取上述溶液各 20ul 注 入液相色谱仪，记录色谱图，结果见表 1.1 ，如下图： 表 1.1 线性关系试验结果 经线性回归分析，在10.60?31.80卩g/ml范围内，直线方 程 Y=91289x+10392， r=0.9999 ，线性关系良好。 2.6 进样精密度试验 取重复性试验项下的一份供试液， 连续进样 6针，记录色谱 图。试验测定结果见表 1.2 ： 表 1.2 进样精密度测定结果 试验结果表明，其 RSD为0.23% 2.10.1色谱条件与 系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇 -水=65：35 为 流动相；Shimadzu VP-ODS （150X 4.6mm）（日本岛津）为色谱 柱；检测波长为250nm 流速为1.0ml/min ;柱温为30C。理论 板数按五味子醇甲峰计应不低于 2500[7] 。 2.10.2 对照品溶液的制备 精密称取五味子醇甲对照品 5.0mg，置50ml量瓶中，用甲 醇溶解并稀释至刻度。精密吸取上述溶液 5ml 至 25ml 量瓶中， 用甲醇定容，即可。（每 1ml溶液中含五味子醇甲20.00卩g）。 供试品溶液的制备 取重量差异项下的本品，研细，精密称定约 0.8g，置25ml 量瓶中，加水约20ml，超声处理使完全溶散，放冷，加水稀释 至刻度，摇匀。精密量取上述溶液 10ml，置分液漏斗中，用乙 醚提取5次，每次15ml，合并醚液，用水洗涤2次，每次10ml, 水洗涤液再用乙醚10ml回提一