典型发酵过程的特性与工业控制2讲解.pptVIP

也可使用磷酸缓冲液，但磷酸对动物细胞 有毒害作用。 HEPES 生物缓冲剂也曾被加 入 NaHCO3/CO2 缓冲系统中，这是由于 HEPES 的 pK 为 7.0 ， HEPES 被加入后，其 缓冲能力为 pH6.8 ～ 7.2 。。但是当 HEPES 浓度高于 25mmol/L 时，它对大多数动物细 胞都有毒害作用。 动物细胞大规模培养时常有几种方法来调节 培养液中的 pH ： （ 1 ）在培养基中添加 NaHCO 3 作为缓冲剂 及通入含 CO 2 的空气进行调节 （ 2 ）用 0.1mol/LNaON 或 0.1mol/LHCl 进 行调节。由于动物细胞培养时要求低搅拌 和弱混合，利用 NaOH 或 HCl 进行调节时 会发生局部过酸或过碱的现象，从而对细 胞产生毒性作用，因此这种调节方法在动 物细胞培养时不太合适。通常通过调节培 养基中 NaHCO 3 用量及通气中 CO2 浓度来 控制发酵过程的 pH 。 3 、溶解氧 大规模培养中如何提供足够的氧 是非常重要的。通气得得目的有 两个：一是提供细胞代谢所需的 足够的氧；二是使发酵液处于均 匀悬浮状态，有利于传质过程。 （三）培养容器 1 、多孔板、 Petri 培养皿和组织培养方瓶都是常 用的静止培养容器，体积小，操作方便，很容易 放入培养箱内培养。 2 、滚瓶 也是一种重要的培养容器，培养时放在 滚瓶机上缓慢滚动，但培养条件很接近于静止培 养。它体积交大，接种后放入温室或专门的培养 箱中培养。培养依赖性贴壁培养细胞时，需加入 微载体以增加培养表面积。 3 、生物反应器是大规模培养中最重要的培养设 备。它有各种不同形式，容积可以从 1 升到几十 立方米。 微载体 微载体是指直径在 60 ～ 250μm 、适合于动物细胞 贴附和生长的微珠。微载体法培养动物细胞有很多 好处 ; ①可在反应器中提供大的比表面积②可采用 均匀悬浮培养，简化了各种环境因素的检测和控制， 提高了培养系统的重演性③可用普通显微镜观察细 胞在微载体上的生长情况④容易放大⑤适合于多种 贴壁依赖性细胞培养⑥容易收获细胞。微载体培养 系统的缺点是：①细胞生长在微载体表面，易受到 剪切损伤，不适合贴壁不牢的细胞生长②微载体价 格较贵，一般不能重复使用③需要较高的细胞接种 量。 悬浮培养 悬浮培养指细胞在培养容器中自由悬浮生 长的过程，主要用于非贴壁依赖性细胞的 培养，如杂交瘤细胞等。动物细胞悬浮培 养与微生物过程比较接近，但由于动物细 胞对搅拌和通气造成的流体剪切很敏感， 在反应器的设计和操作上又有特殊要求如 利用螺旋带叶轮减小生物反应器培养过程 中的剪切作用，并通过表面充气及诱导表 面气泡产生 具有双层滤网的新型搅拌器，它提高了氧 传递速率 第二节 动物细胞培养 动物细胞和微生物细胞的总体差异 内容 微生物细胞 动物细胞 细胞壁 普遍存在 存在 生长速率 0.1~0.5h -1 0.01~0.05h -1 需氧量 高 低 营养要求 普遍简单 复杂 CO 2 需求 一些微生物需 CO 2 许多需要 CO 2 形成缓冲液 环境影响 小 大 大小范围 100~2000nm 10000~100000nm 接种浓度 低 高（ 10 -5. ml -1 ） 生长浓度 高（ 10 9 ~10 10. ml -1 ） 低（ 10 6 .ml -1 ） 一、动物细胞培养的特性 动物细胞培养是指在合适的培养条 件下，动物细胞离体生长和增殖， 并保持其特性和功能的技术，这些 细胞不再形成组织。 1 细胞生长缓慢，易污染，培养需用抗生素 2 细胞大，无细胞壁，机械强度低，环境适 应性差 3 需氧少，不耐受强力通风与搅拌 4 群体生长效应，贴壁生长（锚地依赖性） 5 培养过程产品分布细胞内外，成本高 6 原代培养细胞一般繁殖 50 代即退化死亡 两个专业术语 细胞系：首次分离组织的培养称之为 原代培养。原代培养物经传代成功后 即成细胞系。 细胞株：通过选择法或克隆形成法从 原代培养物或细胞系中获得的具有特 殊性质或标记的培养物称为细胞株。 细胞生长的类型 贴壁依赖性 来自动物实体组织的大多数 细胞需要贴壁单层生长。只要它们没有 转化为非贴壁依赖性的必须贴伏在合适 的固体介质上并铺展，才能生长。 非贴壁依赖性细胞 无需贴附到固体介质 上就能生存和生长的细胞。来自血液、 淋巴系统的细胞和大多数肿瘤细胞常为 非贴壁依赖性的，它们形态呈圆形。 生长特