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黄芪-黄连药对治疗2型糖尿病的机制研究 糖尿病是一组以慢性高血糖为特征的代谢紊乱性疾病，属中医学“消渴病”范畴。其中2 型糖尿病(T2DM) 占所有糖尿病患者的95%左右，严重威胁人类健康本研究从数据库查找出常用的降糖中药复方，并找出复方组成中治疗T2DM使用频率较高的中药组成药对，利用网络药理学构建中药有效成分-疾病-靶点网络图，找出作用靶点及蛋白-蛋白作用关系网络，并进行生物学功能分析。结合动物模型实验研究，观察药对对T2DM大鼠的治疗作用及探讨其作用机制。为中医临床治疗T2DM的正确用药及新药研究提供理论和数据支撑。1 材料和方法1.1 资料检索 利用cnki数据库检索治疗T2DM的常用中药复方，检索日期为建库至2020-12-31。检索词为“2型糖尿病”或“T2DM”和“中药治疗”。通过VENN图找出3个以上复方中共同的中药组成。通过查找单味药治疗T2DM的使用频率，把最常用的2味中药作为新药对纳入后续研究。1.2 中药有效成分的查询 通过TCMSP数据库1.3 有效成分作用靶点的查询 通过SEA和SwissTargetPrediction数据库进行有效成分对应的靶点查询1.4 PPI网络图构建和生物学功能分析 利用String数据库查询中药作用于疾病靶点的相关蛋白，选取score≥0.9的相关蛋白生成PPI网络图1.5 复制T2DM大鼠模型 Wistar 大鼠50 只，雄性，体质量160～200 g，维通利华实验动物技术有限公司提供，动物合格证号SCXK（京）2016-0006。链脲佐菌素( STZ) 1 g/瓶 ，购自Sigma公司，批号033K0941，低温避光保存，现配现用。高脂高糖+链脲佐菌素组，喂饲高脂高糖饲料（10%猪油，15%蔗糖，2%胆固醇和73%基础饲料）。对照组喂饲基础饲料。6 周时，高脂高糖+链脲佐菌素组腹腔一次性注射30 mg· kg1.6 分组和给药方法 于造模后第3 天禁食24 h 后，测量血糖并筛选出血糖＞11.1 mmol· L1.7 血糖血脂检测方法 剪尾尖取血，全血葡萄糖测试仪(北京怡成生物电子技术有限公司，JPS-6 型)测定血糖值。血清CHO、TG、LDL、HDL 检测方法是各组大鼠禁食不禁水过夜，末次给药2 h 后，用10%水合氯醛腹腔注射（3.5 mL·kg1.8 胰腺病理切片的制作和染色方法 实验结束时取大鼠整个胰腺，10% 甲醛溶液固定，石蜡包埋，5 μm连续切片，分别用苏木精-伊红(HE)和Masson 三色染色法对实验大鼠的胰腺组织进行染色。IX70型倒置荧光显微镜( Olympus IX-70，日本) 观察并拍照分析。1.9 统计学方法 应用SPSS 19.0 统计学分析软件进行数据处理，数据均以均数±标准差表示。组间比较满足方差齐性时采用单因素方差分析，不满足方差齐性时采用非参数检验，2 结果2.1 黄芪-黄连可能是治疗T2DM的有效药对 通过文献检索发现中药治疗糖尿病的主要复方为参芪降糖胶囊、芪贞降糖颗粒、降糖通脉胶囊和糖微康胶囊。4种降糖复方组成中药相交后获得了5个常用中药：黄芪、麦冬、地黄、黄连、丹参。分别是降糖通脉胶囊，芪贞降糖颗粒，参芪降糖胶囊和糖微康胶囊共有黄芪和麦冬2个中药；芪贞降糖颗粒，参芪降糖胶囊和糖微康胶囊共有地黄1个中药；降糖通脉胶囊，芪贞降糖颗粒和糖微康胶囊共有黄连和丹参2个中药。黄芪、麦冬、黄连、丹参和地黄是5个常用中药（图1）。再分别检索这5个单味药治疗T2DM的使用频率，发现黄连和黄芪的使用频率最高，分别是1 268、1 132次，因此黄芪-黄连具有联合应用治疗T2DM的理论基础。故本研究重点探讨黄芪-黄连药对治疗T2DM的机制。2.2 黄芪-黄连药对确认的有效成分 通过数据库查询和ADEM筛选，将TCMSP和TCMID数据库均收录的有效成分纳入后续研究，并根据文献报导进行了适当的补充2.3 药对-成分-疾病-靶点网络图的构建 上述20个有效成分，其中15个有效成分查获作用靶点228个。Uridine、guanosine、jatrorrhizine、javanicin、coniferin这5个有效成分未查获作用靶点。3个数据库共获得T2DM相关的疾病靶点164个。通过药对-成分-疾病-靶点网络图的构建，发现ras相关C3肉毒毒素底物1（ras-related C3 botulinum toxin substrate 1, RAC1）、对氧磷脂酶1 （paraoxonase 1, PON1）、2.4 作用靶点的蛋白-蛋白相互作用关系网络图 通过作用靶点的蛋白-蛋白作用关系网络图的构建，对核心蛋