高效液相色谱法.ppt

;第一节 概述;精品资料; 你怎么称呼老师？ 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你是否会认为老师的教学方法需要改进？ 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ 教师的教鞭 “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我笨，没有学问无颜见爹娘 ……” “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”; 早期液相色谱，包括Tswett的工作，都是在直径1~5cm, 长50~500cm的玻璃柱中进行的。为保证有一定的柱流速，填充的固定相颗粒直径多在150~200?m范围内。即使这样，流速仍然很低(1mL/min)，分析时间仍然很长！ 当加压增加流速(真空或空气泵)时，尽管分析时间减少，但柱塔板高度Hmin也相应增加了！或者说柱效下降了。 为了解决分析时间及柱效问题，人们认识到：最为有效地增加柱效的唯一方法是减小填充物的粒径（3~10 ?m ）！ 直到60年代，由于在高压下操作的液压设备、高效固定相以及高灵敏检测器的出现及发展，才彻底解决了分析时间及柱效的问题。即所谓的高效液相色谱技术才真正得到广泛应用。 ;;二、HPLC与GC的比较 分析对象及范围： GC分析只限于气体和低沸点的稳定化合物，为有机物总数的20%； HPLC可以分析高沸点、高分子量的稳定或不稳定化合物，占有机物总数的80%。 色谱理论(Van’方程): GC (H=A+B/u+Cu)； HPLC (H=A+Cu)。 流动相的选择： GC为有限的几种“惰性”气体，只起运载作用，对组分作用小； HPLC为液体或各种液体的混合，它除了起运载作用外，还可与组分作用，并与固定相对组分的作用产生竞争，即可通过溶剂来控制和改进分离。 操作温度： GC需高温； HPLC通常在室温下进行。 ; ; ;He;;马达; ;;;波长;;;;第三节 HPLC流动相和固定相简介;二、固定相载体 由于各种HPLC分离方法的流动相均为液体，因此，HPLC通常是按照固定相载体或固定液的不同来分类的。 1. 按承受压力分： 刚性固体：SiO2为基质，耐压为7.0×108~1.0×109 Pa。可制成直径、形状和孔隙 深度不同的颗粒；主要用于吸附、分配和键合色谱； 硬 胶：以聚合物为基质(常用苯乙烯与二乙烯苯交联而成)，耐压上限为3.5× 108 Pa, 主要用于离子交换和尺???排阻色谱。;2. 按孔隙深度分： 表面多孔型：以实心玻璃珠为基体，在基体表面覆盖一层多孔活性材料(如硅胶、 氧化铝、离子交换剂、分子筛、聚酰胺等)。表面多孔型固定相的颗粒大(易装柱)、多孔层厚度小且孔浅(渗透性好，出峰快)；但交换容量小。适于常规分离分析。 全多孔型：全部由硅胶或氧化铝微粒聚集而成，因颗粒极细，因而孔径小、传质快、 柱效高。特别适于复杂混合物的分离。 3. 按分离原理分： 分配色谱、吸附色谱、离子交换色谱、尺寸排阻色谱和亲和色谱等 ;第四节 HPLC方法各论;;;4. 正相(NP)和反相(RP)键合色谱法 正相键合色谱中，随流动相极性增加，组分分配比k增加。 在HPLC分析中，有时要在流动相中加入适量的盐(碳酸铵、四烷基铵盐)或酸，为什么？答：都是为防止峰形拖尾。加入盐类是为了减少待测物与键合相表面的残留硅醇基作用；加入酸是抑制酸类待测物的离解，使其以游离酸在柱内分离。 ;时间，min;;2. 固定相 按离子交换剂类型分四种： 按固定相制作方法可分为： 多孔型离子交换树脂(包括微孔型和大孔型)； 表面多孔型(包括薄膜型）离子交换树脂； 离子交换键合型。;;;例如：分析阳离子时，以无机酸为流动相，抑制柱为高容量的强碱性阴离子交换树脂，则发生下列反应： R+—OH + HCl(流动相)——R+—Cl- + H2O R+—OH + MCl(待测物) ——R+—Cl + M+OH- 可见，不仅大量酸转化为低电导的水，而且待测离子转化为具有更大淌度的碱。 该法的不足之处在于：抑制柱要定期再生、谱峰在经过抑制柱后会展宽，降低分离度。因此有人提出了使用电导率很低的溶液(如苯甲酸盐稀溶液)作流动相。 ;;; ; ; 色谱分离方法的选择