临床免疫学本科课件免疫学检测技术.pptVIP

免疫学检测技术;特异性 比例性 可逆性 阶段性;电解质 生理盐水或缓冲液，Ca2+，Mg2+ 酸碱度 pH6～8，补体～ 温度 15℃～40℃，37℃最适 冷凝集素4℃最适 ;检测抗原和抗体的体外实验; 颗粒性抗原或吸附于载体颗粒上的可溶性抗原（或抗体）与相应抗体（或抗原）结合，在电解质参与下，出现肉眼可见的凝集现象。;颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的参与下，出现肉眼可见的凝集现象。 常用颗粒性抗原：红细胞、细菌等 玻片法和试管法;玻片凝集试验;;试管凝集试验; 将可溶性抗???或抗体吸附于颗粒性载体表面，与相应的抗体或抗原结合，在电解质的参与下，出现肉眼可见的凝集现象。;用已知抗原致敏载体 --- 检测未知抗体 ;用已知抗体致敏载体 --- 检测未知抗原;二、沉淀反应;沉淀反应的类型;（一）免疫浊度测定的原理;; 可溶性抗原与相应抗体在含有电解质的凝胶中向四周扩散，形成浓度梯度，两者相遇并在比例合适处形成肉眼可见的白色沉淀物。 ;;（沉淀环直径)2;;原理示意图; 1.周围6个孔放不同稀释度的相应Ab。; “1” 为单一抗原抗体系统。;; ;基本原理： 酶免疫技术是利用酶标记抗体(抗原) 与相应抗原(抗体)反应形成抗原-抗体-酶复合物，酶催化相应的底物显色，根据颜色变化和显色深浅进行定性和定量。 ;辣根过氧化物酶（HRP） ;微量反应板;; ;临床免疫学本科课件免疫学检测技术;临床免疫学本科课件免疫学检测技术;临床免疫学本科课件免疫学检测技术;（二）荧光免疫技术;常用荧光色素;FITC;1、直接法;2、间接法;; 阳性细胞显色有胞质型、胞核型、膜表面型， 显色深浅可作为抗原定性、定位和定量依据。 “-”为无或仅见极微弱荧光； “+”为荧光较弱但清楚可见； “2+”为荧光明亮； “3+”为耀眼的强荧光。 “2+”以上判定为阳性，对照光应呈“-”或“±”。;①自身抗体检测;（三）放射免疫技术;电化学发光免疫分析（ECLIA）是以电化学发光剂三联吡啶钌标记抗体(抗原)，以三丙胺(TPA)为电子供体，在电场中因电子转移而发生特异性化学发光反应。 ;临床免疫学本科课件免疫学检测技术;电化学发光免疫测定示意图;*;胶体金结合物;固相NC膜;DICA 试剂条; DICA——双抗体夹心法测抗原;试验方法;临床免疫学本科课件免疫学检测技术;免疫印迹试验;临床免疫学本科课件免疫学检测技术;免疫细胞功能的检测;PBMC包括：淋巴细胞、单核细胞 各种血细胞比重不同,利用密度梯度离心进行分离 常用分层液：ficoll－hypaque，percoll ;　　聚蔗糖-泛影葡胺分层液(ficoll)法是一种单次密度梯度离心分离法，主要用于分离外周血中的单个核细胞。 原理： Ficoll分层液：密度 将肝素抗凝全血加在分层液上，水平离心;Ficoll分层液分离单个核细胞示意图;方法类型： 花环沉降法——T细胞-绵羊红细胞受体(CD2);E花环沉降法;;;;;细胞悬液形成液流柱;三、免疫细胞功能测定;T淋巴细胞