分子诊断学：单基因遗传病的分子诊断.pptVIP

a -地贫的基因型与表现型 Hb Barts Hydrops (--SEA/--SEA) Hb Bart’s 水肿胎儿综合症 －4个?基因缺失或丧失功能 患胎于妊娠晚期或产后数小时内死亡，全身水肿，肝脾肿大。由于胎儿无法合成?亚基，脐血血红蛋白（ Hb Bart’s ，?4）含量高。 a-地贫疾病严重程度的单倍型顺序 a2a1T a2- - a1a2Ta1 -a1T - - 纯合的α-地贫基因型突变，为严重的HbH，偶可致胎儿水肿或者死亡 ?-地中海贫血 ?-地中海贫血是一种由于?-珠蛋白基因突变导致肽链合成减少或缺乏而产生的单基因遗传血液病，多由?-珠蛋白基因点突变所致。 在中国人群中常见的突变位点有CD41-42M， -28M， IVS-II-654M，CD71-72M等。 11ｐ15.5 EXON 1 IVS 1 EXON 2 EXON 3 IVS 2 Promoter mutation RNA splicing Initiation mutation Frameshift Nonsense Poly(A) signal β地中海贫血的点突变 b-地贫的基因型与表现型 重型?-地中海贫血 所有患者有组织缺氧症状，可出现“地中海贫血面容”，生长发育迟缓。红细胞体积小且低色素。过剩的游离α链形成α链包涵体，引起溶血性贫血，靠输血维持生命。 ?＋/ ?＋、?0/ ?0 、?0/ ?＋ （纯合子或双重杂合子） 轻型?-地中海贫血 患者症状较轻，轻度贫血，轻度肝脾肿大。红细胞脆性降低，小细胞，低色素，MCV、MCH较低。 ?/ ?＋、?/ ?0 （杂合子） b-地贫的基因型与表现型 中间型?-地中海贫血 患者临床症状介于重型和轻型之间，如中度偏重贫血，生长发育迟缓，黄疸等。血液检查呈小细胞低色素贫血症。 ?＋/ ?＋、?＋/ ?0 （纯合子或双重杂合子） 筛查的方法 血常规 MCV，MCH，RDW Hb typing HbA2，HbF，HbH，Hb bart’s, HbE, HbS （血红蛋白电泳，HPLC，毛细管电泳） 基因诊断 Gap-PCR 反向斑点杂交 Gap-PCR原理 Location of primers and detection of --SEA deletion by gap-PCR 缺失型α-地贫的分子诊断（Gap-PCR） Location of primers and detection of --SEA deletion by gap-PCR ψα2 ψα1 α2 α1 ?1 ζ ψζ -a3.7 -a4.2 --SEA P4 P3 P1 P2 ? -珠蛋白基因型 PCR产物片段长度 -? 3.7 2.0kb P3===P2 ?? 1.8kb P3===P4 -? 4.2 1.6kb P1===P4 --SEA 1.3kb P1===P2 ?-地中海贫血基因诊断结果判读 M. DNA Marker 1. 未发生-? 3.7、-? 4.2、--SEA缺失 2. 发生-? 4.2缺失 杂合子 3. 发生-? 3.7缺失 杂合子 4. 发生-? 4.2缺失、--SEA缺失 5. 发生-? 3.7缺失、--SEA缺失 6. 发生--SEA缺失 杂合子 M 1 2 3 4 5 6 M ? -珠蛋白基因型 PCR产物片段长度 -? 3.7 2.0kb ?? 1.8kb -? 4.2 1.6kb --SEA 1.3kb 注： 反向点杂交技术 膜条显色原理 生物素 链霉亲和素-过氧化物酶复合物 TMB H2O2 　固定在膜上的探针 ?-地中海贫血点突变基因诊断结果判读 未发生? QS、 ? CS、 ? WS点突变 发生? WS点突变 杂合子 发生? CS点突变 杂合子 发生? QS点突变 杂合子 注： 纯合子、杂合子，需结合?-地中海贫血缺失型的结果来判断 PCR-引物的设计 HBB gene HBB1 HBB2 41 42 71 72 654 点突变的分子诊断（反向点杂交技术） β-地中海贫血基因诊断结果判读 41-42N 654N －28N 71-72N 17N βEN 31N 27/28M 41-42M 654M －28M 71-72M 17M