分子诊断学：第五章 生物芯片技术.pptVIP

基质辅助的激光解吸附电离化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS) 原理：利用激光脉冲辐射使芯池中的待分析样品解离形成荷电离子，由于具有不同质荷比，这些离子在仪器场中飞行的时间长短不一，由此绘制出一张质谱图，经计算机软件处理得到模拟谱图，对结果进行分析。 特点：快速、敏感，特异性高，同时不会破坏所测定的蛋白质。 二、蛋白质芯片制作和检测的基本流程 FB MSC FB VEGF IL6 MIP-1b IGF-1 HGF osteoprotegrin Pos Neg 蛋白质芯片 Antibody-based protein array 由于蛋白数目极其庞大 (～200000), 利用蛋白质芯片建立蛋白高通量检测技术去研究在不同时间和空间发挥功能的特定蛋白质群体，从而揭示和说明生命活动的基本规律, 其将会使生命科学的研究进行另一次飞跃。 蛋白质芯片的优缺点 优点: 高效率: 同时检测成千个蛋白 敏感性高 缺点: 制作复杂,成本较高 现行没有令人满意蛋白质表达系统 优点 三、蛋白质芯片的应用 在基础研究中的作用 抗原-抗体相互作用、蛋白质-蛋白质相互作用、酶-底物 相互作用、配体-受体相互作用、高通量的蛋白质表达筛 选及检测翻译后修饰等 2. 在临床研究中的作用 发现新的疾病标志物作为临床诊断的指标 （正常人群和疾病人群蛋白表达谱的比较） 对疾病病理分子机制的研究 筛选药物靶点，发现新药物，研究药理学 三、蛋白质芯片的应用 芯片实验室是将样品制备、生化反应和检测分析的全过程集约化，并缩微到一张芯片上自动完成，形成的所谓微型全分析系统（micro total analysis system,μ-TAS）,或称“缩微芯片实验室”（lab-on-a-chip）。 芯片实验室 一、缩微芯片实验室特点 分析全过程自动化 分析速度快 所需样品少 极高的样品并行处理能力 体积小 便于携带 缩微芯片实验室应用新进展 Affymitrix公司和宾夕法尼亚大学医学院和密歇根大学的科学家们利用在微缩芯片上刻出的加热器、泵、阀门、微量分析器、电化学检测器以及其他光电子检测器等，已经先后制作出了结构不同的微缩芯片实验室样机，向人们展示了制作微缩芯片实验室的可能性。 在意大利，研究人员利用微机电系统技术开发出一种芯片实验室原型，这种芯片有非常优秀的特性，是分析DNA的理想工具 在瑞典，研究人员开发出一种纳米实验室，能在1小时内同时处理480种蛋白质样本，如缩氨酸图、DNA排序等。 芯片实验室的另一应用是制成一次性的用品，如检验卡等，可以用于医院，也可以作为消费者用品，用途很广泛，市场潜力巨大。 芯片序列捕获技术 芯片序列捕获技术是根据核酸分子碱基互补杂交原理发展的。 即根据目标基因组序列，设计与之完全互补的探针，将这些探针固定在某些支持物上（用于分离），然后打断基因组DNA，加上接头（用于测序）后与探针杂交，洗脱未杂交上的DNA，回收目标DNA片段，可以直接建库进行DNA测序 。 芯片序列捕获技术 根据杂交状态不同，芯片序列捕获可以分为固相杂交法和液相杂交法。 固相杂交法所用的探针通常都是固定在固体支持物上。 固相捕获系统的试验流程： 1. 选定目标DNA区域，在修饰了的玻璃片基上原位合成一系列与目标区域互补的探针，固定在芯片上。 2.基因组DNA片段化处理，构建文库。 3.DNA片段与芯片上的探针杂交。 4.清洗芯片，去除未结合序列，然后将富集后的DNA片段洗脱下来。 5.PCR扩增捕获的DNA片段，检测达到质控要求后进行高通量测序。 芯片序列捕获技术（流程图） 芯片序列捕获技术 液相杂交与固相杂交最大的差异在于杂交反应的环境不同。 液相杂交是在溶液中，目标DNA片段和已带有生物素标记探针直接杂交，然后通过生物素亲和素的反应使目标DNA片段锚定在带有亲和素的微珠上。 洗去非目标DNA，洗脱后，富集的DNA用于测序。 液相杂交与固相杂交相比有两大优势： 第一、杂交效率更高； 第二、易于操作，时间短，便于自动化操作。 芯片序列捕获技术 主要优点： 1.高效、定向地捕获目标区域 2.具有高均一性、高覆盖率 3.具有高度灵活性 4.省时、省力、省成本 * * * * * * * * * * * 5. 在疾病诊断的应用 （1）感染性疾病的诊断 性传播疾病、肝炎等。 （2）遗传性疾病的诊断 地中海贫血、婚前检查等。 （3）耐药性检测 结核分支杆菌耐药性检测芯片等。 5、疾病诊断 其优点有以下几个方面： 一是高度的灵敏性和准确性； 二是快速简便； 三是可同时检测多种疾病。 基因表达水平的异常可引起疾病 肿瘤细胞多种致癌基因表达升高 肿瘤细胞多种肿瘤抑制基因表达降低 常染色体显性遗传性多囊肾 Pol