分子诊断学：第一章 核酸与分子标志物.pptVIP

表观遗传与基因功能 表观遗传学（epigenetics） 指基于非基因序列改变所致基因在表达水平上的变化，如DNA甲基化和染色质构象变化等。 包括：组蛋白修饰、DNA甲基化等 （一）组蛋白修饰（histone modification） 组成核小体的组蛋白的核心部分状态大致是均一的，游离在外的N-端则可以受到各种各样的修饰，主要有甲基化(me)、乙酰化(Ac)、磷酸化(P)、泛素化，ADP-核糖基化等修饰方式。 根据修饰位点以及修饰状态的不同，甲基化修饰可以激活或抑制基因转录，从而参与正常生理（如个体发育、胚胎干细胞定向分化等）过程，同时也参与病理过程（如癌症的形成和发展）。 （二） DNA甲基化（DNA methylation） DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，是哺乳动物DNA最常见的复制后调节方式之一。 由甲基转移酶介导，将胞嘧啶（C）转变为5-甲基胞嘧啶（5-mC）。 DNA甲基化能关闭某些基因的活性，去甲基化则诱导了基因的重新活化和表达。即基因在它不表达的组织中被甲基化，而在特异表达的组织中非甲基化。 基因组总体甲基化水平降低和局部DNA区域（如抑癌基因启动子区）甲基化水平的异常升高，导致了染色体的不稳定。 甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR, MS-PCR） 是一种特异位点甲基化检测技术。其基本原理是用重亚硫酸氢钠处理基因组DNA，未甲基化的胞嘧啶变成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变。 MS-PCR中设计两对引物，两对引物分别只能与重亚硫酸盐处理后的序列互补配对，即一对结合处理后的甲基化DNA链，另一对结合处理后的非甲基化DNA链。 检测MS-PCR扩增产物，如果用针对处理后甲基化DNA链的引物能扩增出片段，则说明该被检测的位点存在甲基化；若用针对处理后的非甲基化DNA链的引物扩增出片段，则说明被检测的位点非甲基化。 基因突变（gene mutation） 由于DNA分子中发生碱基对的增添、缺失或替换，而引起可遗传的基因结构的改变，称基因突变。 一个基因内部可以遗传的结构的改变。称为点突变，通常可引起一定的表型变化。 广义的突变包括染色体畸变。狭义的突变专指点突变。 （一）点突变 错义突变（missense mutation） 指碱基对的置换使mRNA的某一个密码子变成编码另一种氨基酸的密码子。 错义突变可导致机体内某种蛋白质或酶在结构及功能发生异常，从而引起疾病。 指某个编码氨基酸的密码子突变为终止密码子，多肽链合成提前终止，产生没有生物活性的多肽片段。 突变在多数情况下会影响蛋白质或酶的功能。 无义突变（nonsense mutation ） RNA加工突变 是由于mRNA前体内含子末端的序列剪接位点突变而引起剪切错误的突变。如：β地中海贫血症 （二）插入\缺失突变 缺失突变 基因因为较长片段的DNA的缺失而发生突变，属于染色体畸变。 插入突变 一个基因的DNA序列插入一段外来的DNA后，其结构被破坏而导致突变。 插入的DNA分子可以通过切离而失去，准确的切离可以使突变基因回复成为野生型基因。 基因损伤引起mRNA阅读框架内的碱基发生插入或缺失，可能导致框移突变(frameshift mutation)。 （三）动态突变（dynamic?mutation) 指DNA中的碱基重复序列拷贝数发生扩增而导致的突变。在动态突变中的重复单位片段的大小从3个碱基到33个碱基长度不等。 在动态突变与疾病相关的研究中，发现扩增的重复序列是不稳定地传递给下一代，往往倾向于增加几个重复拷贝；重复拷贝数越多，病情越严重，发病年龄越小。 动态突变检测原理 可用PCR直接扩增技术检测基于短串联重复序列（STR）拷贝数的DNA片段长度多态性 第一章 核酸与分子标志物 核酸（nucleic acids) 以核苷酸为单位的生物大分子 脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA） 核糖核酸（ribonucleic acid，RNA） 分子标志物（molecular biomarkers) 指可以反映机体生理或病理状态的核酸 、蛋白质、代谢产物等生物分子。 核酸分子标志物 种类：基因突变、DNA多态性、微小RNA（miRNA）、循环核酸等 第一节 核酸的结构和功能 DNA的结构与功能 （一）DNA的组成 DNA是由脱氧核苷酸的单体聚合而成 每一种脱氧核苷酸