溶菌酶的作用机制.pptxVIP

Determihg the Mechanism of Lysozyme Action -溶菌酶的作用机制制作:靳晶溶菌酶是如何被发现的?亚历山大?弗莱明 (Alexander Fleming), 1881年8月6日出生于___苏格兰艾尔郡洛奇菲’ 尔德。他是苏格兰低 -地农民的后裔，家境贫寒。*________因发现了青霉素以及它 对多种传染性疾病的 治疗作用，荣获1945 年诺贝尔生理学或医 学奖。 ? 1922年的一天，正在感冒的英国细菌学家* Alexander Fleming发现，把一些鼻粘液加入 细菌的培养基后会引起细胞的溶解。；而这种 存在于鼻粘液中的能杀死细菌的重要物质被 认为峯T种酶，Fleming命名其为溶菌酶(Lysozyme )。 .起初，Fleming对这种有杀死细菌活性的 物质的实验不过是出于一种兴趣。但在目 暗了一战中大量的士兵死于外伤感染之后，■ Fleming开始试图倾其毕生来寻找一种能够 有效杀死细菌，同时X能对人类保持相对 的无毒性的药剂。不象Flemin茹1928年发 现的避素(penicillin),溶菌酶不能证 明有I命价值。但是在酶机制的研究学习 方面，溶菌酶扮演了一个很重要的角色。. 在 1965年,David Phillips和他在牛津的同事以0.2nm分辨率的又射线 晶体(X-ray crystallography) 结 构分析法阐明了溶菌酶的三维结 构代rtiary structure) o溶菌酶是从鸡蛋清中提炼的，蛋清里的■ 溶菌酶可以保护胚胎在发育过程中免受 细菌的感染。溶菌酶溶解细菌是通过水 解细菌细胞壁多糖(the polysaccharide of th岳bacterial cell wall)的糖甘键 (glycosidic bonds)。?而敏感细菌［革兰氏阳性细菌(grampositive bacteria)］的细胞壁多糖是N-.. 乙酰氨基葡糖(N-acetylglucosamine, NAG) -N-乙酰氨基葡糖乳酸(N-acetylmuramic acid, NAM)的共聚物， 其中?的NAG及NAM通过卩-1, 4糖苜 键而交替排列。’NAMNAGNAMNAG溶菌酶相对分子质量为14.6X103,由 十29个氨基酸组成的单肽链蛋白质，含 ■有4对二硫键。夫小为溶菌酶分子近椭圆形，大小为 4.5nmX3.0nmX3.0nnio它的构象比较复 杂，值螺旋仅占25%,在分子的一些区 域有祢尾著南J ￡片会#勾系。瀋菌酶是一种葡糖昔酶，能催化水解NAM -的C1和NAGfi勺C4之间的糖甘键七但不能水 解NAG Cl和NAM C4之间的p (1-4)糖昔 键。几丁质是甲壳类动物甲壳中所含的多 糖，仅由NAG残基通过0 (1-4)糖昔键连 接而蒔儿丁质也是溶菌酶的底物。’溶菌酶的内部几乎全部是非极性的(nonpolar)。疏水的相互作用在溶菌* 酶的折叠构象中起重要作用。荏溶菌酶 分子的表面，有一个比较深的裂缝，其 大小恰好能容纳多糖底物的％个单糖， 这岛溶菌酶的活性部位。「底物与龐结合后，.■S酶催化哪一不键水解呢?用大小不同的NAG寡聚体作底物测定被溶 南酶水解的相对速率，结果发现，少于4个 ?糖的寡聚体氷解速率甚小，当由四聚体增 加到五聚体时，水解速率猛增500倍，五聚 体增加到六聚体，速率增加近8倍，六聚体 增加到八聚体，速率不再变花。这种情况 与X射线晶体结构分析结果一致，活性部位 所在的裂缝(cleft)正好被6个糖残基所装 满。(NAG) 3是溶菌酶的竞争抑制剂，因此A.B, R-C糖昔铤均不可能是被水解的键。C环的 ■空间对NAM?来说体积太大，只能是NAG。，C-D也不可能成为裂解的部位，,而NAM不 能适合到部位C中，近一步排除了另外一个 裂解部位：E-F键。胞壁多糖是L个NAM和 NAG交替的高聚物，从而NAM不能占据部 位就不能占据部位E。细菌的细胞壁 多糖恰好具有NAM-NAG键，所以水解部位 只能发生在D-E之间。用X形线晶体结构分析法研究了竞争性抑制剂（NAG） 3仅仅占据了大约半个裂缝。从 信性部位的几何大小看出酶的最小底物应r 该是（NAG） 6o实验中用（NAG） 为底物，确实能被酶迅速水解。酶活性部位刚 好能容纳一个六糖分子，A、R、C、D、E、F表示6个糖残基的位置，只是第4个糖残基 D环唯间的原因必须由正常的椅式变形为能量较高的半椅式或“沙发”构造。因此. 糖昔键的稳定性减低，键就容易从这里断 裂。.-进一步的问题是酶的催化 作用，究竟键是在糖昔键 原无的哪一侧被裂解的？冋答这个问题可以在出贸。溶液中酶促水 解底物（NAG） 6，发现只有D糖Cl上含 -有180,而阈普的C4羟基只含普通的0,由此可知这个键断裂在D糖基