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- 2021-08-09 发布于四川
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选修 3 《现代生物科技专题》学问点
专题 1 基因工程
1. 基因工程为指依据人们的愿望,进行严格的设计,通过 体外 DNA重组 与转基因技术, 赐予生物以 新的遗传特性 ,制造出更符合人们需要的新的生物类型与生物产品; 基因工程为在DNA分子水平 上进行设计与施工的,又叫做 DNA重组技术 或基因拼接技术2.基因工程的基本工具包括“分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶(限制酶), “分子缝合针”—— DNA连接酶, “分子运输车” 载体
限制性核酸内切酶主要为从 原核生物 中分别纯化出来的;它能够识别双链
DNA分子的某种 特定 的核苷酸序列, 并且使每一条链中 特定 部位的两个核苷酸之间的 磷酸二酯键 断开, 因此具有 专一 性;经限制酶切割产生的 DNA片段末端通常有两种形式: 黏性末端与平末端 ;
依据酶的来源不同, DNA连接酶可分为两大类,一类为从大肠杆菌中分别得到的,称为
E·coli DNA 连接酶, 另一类为从 T 4 噬菌体中分别出来的,称为
T 4 DNA 连接酶,这两种连接酶的相同点为都缝合 磷酸二酯 键;
作为载体具备的条件:
①具有复制起点 , 能在受体细胞中复制并稳固储存 ;
②具有一至多个限制酶切割点,供外源 DNA片段插入 ;
③具有遗传标记基因,供重组 DNA的鉴定与挑选 ;
最常用的载体为 质粒, 它为一种暴露的,结构简洁的,独立于 细菌染色体之外, 并具有 自我复制才能的 双链 环状 DNA分子;除质粒外,常用的载体仍有: 噬菌体的衍生物,动植物病毒 ;在基因工程操作中,真正被用作载体的质粒, 都为在 自然质粒 的基础上经过 人工改造 成的;
基因工程的原理为 基因重组 ,基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤: 目的基因的猎取,基因表达载体的构建 ,将目的基因导入受体细胞 _,目的基因的检测与表达;
目的基由于指 编码蛋白质 的结构基因, 可以从自然界已有的物种中 直接分别 获得, 也可以人工合成 ;人工合成目的基因的常用方法有 PCR法,反转录法 _与化学合成法 _;
PCR 技术扩增目的基因的原理为 DNA双链复制, 过程为:第一步:加热至 90~ 95℃ DNA受热变性后解为单链 ;其次步:冷却到 55~ 60℃, 引物与单链相应互补序列结合 ;第三步: 加热至 70~ 75℃, DNA 聚合酶从引物起始进行互补链的合成 ;
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构建基因表达载体为使目的基因在受体细胞中 稳固存在 ,并且可以 遗传给下一代 ,同时使目的基因能够 表达与发挥作用 ;一个基因表达载体的组成必需有 目的基因 ,启动子 ,终止子 ,标记基因;
启动子为一段有特殊结构的 DNA片段 ,位于基因的 首端 ,为 RNA聚合酶 识别与结合的部位,能驱动基因 转录出 mRN,A 最终获得所需的 蛋白质 ;终止子也为一段有特殊结构的 DNA片段 ,位于基因的 尾端;标记基因的作用:为为了鉴定受体细胞中 为否含有目的基因 ,从而将 含有目的基因的细胞 挑选出来;常用的标记基由于 抗生素基因 ;
转化为指 目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维护稳固与表达的
2+过程; 将目的基因导入植物细胞:采纳最多的方法为 农杆菌转化法 ,其次仍有 基因枪法 与 花粉管通道法 等;将目的基因导入动物细胞:最常用的方法为显微注射技术 ;此方法的受体细胞多为 受精卵 ;将目的基因导入微生物细胞时,常用原核生物作为受体细胞,缘由为原核生物 繁衍快,多为单细胞,遗传物质相对较少 , 最常用的原核细胞为 大肠杆菌 , 其转化方法为:先用 Ca
2+
处理细胞,使其成为 感受态细胞 , 再将 重组表达载体 DNA分子 溶于缓冲液中与感受态细胞混合,在肯定的温度下促进感受态细胞吸取 DNA分子,完成转化过程;
目的基因导入受体细胞后,为否稳固维护与表达,需要进行检测;第一要检
测 转基因生物的染色体 DNA上为否插入了目的基因 ,方法为采纳 DNA 分子杂交技术 ;其次仍要检测 目的基由于否转录出了 mRN,A 方法为 用标记的目的基因作探针与 mRNA杂交 ;最终检测 目的基由于否翻译成蛋白质 ,方法为从转基因生物中提取蛋白质,用相应的抗体进行 抗原-抗体杂交 ;有时仍需进行 个
体生物学水平 的鉴定;如 转基因抗虫植物为否显现抗虫性状 ;
基因工程飞速进展,应用广泛,植物基因工程主要用于 提高农作物的抗逆才能, (如抗虫,抗病,抗
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