LCMS谱图判断及分析方法选择.docVIP

LCMS谱图判断及解析方法选择 LCMS谱图判断及解析方法选择 LCMS谱图判断及解析方法选择 LCMS谱图的判断及解析方法确实定 一、LCMS谱图的相关标准及 M S棒图判断： a) LCMS合格谱图的标准： 1、UV谱图主峰的保存时间应大于 2T0( 进样峰时间) ，并小于全部运行时间的 4/5； 2、UV谱图的吸取波长以客户指定波长为准 〔一般为 220nm〕，弱紫外样品 〔紫外吸 收在 220nm是波谷，MS信号相对较强〕 可用 ELSD谱图交货或以客户要求为准； 3、UV谱图主峰吸取一般应高于 100ma。u 对信噪比优异的样品，能够适合降低峰 高要求到高于 50mau， 当全部可见的 UV峰都积分后仍合格的，能够为合格； 4、UV谱图中，主峰理论塔板数在 10000以上〔即峰宽小于 0.5 分钟〕，峰对称因 子应在 0.9-1.2 〔即对称性较好〕 。 5、MS谱图应保证准分子离子峰可见， 其他峰是二聚峰， 以及合理的碎片或加合峰。 6、MS范围：平时在 100-1000 之间，对分子量很小或很大的样品， 应调整 MS范围， 保证最大值高出 2M+2，3 最小值小于 M/2。 7、紫外积分高出 2 %的杂质，若是杂质的 MS和主峰一致，需检查结构可否有异构 体。如客户确认有异构体并赞成能够合并纯度交货，方能判断合格，否那么应重 新分别或用其他手段如 NMR确定结构。 8、紫外无积分或积分结果小于 1 %的色谱峰，在 TIC 中峰高不得高出主峰的 1/2。 〔特别情况除外：难电离样品；Agilent LCMSTIC 中杂质绝对吸取小于 50000〕 b) M S棒图的判断〔正离子检测〕 ： 1、MS谱图中分子离子峰的值应为：EM+〔1 Exact Mass〕( 即[M+H] +) 2、常有的合理的加合离子有：[M+Na] +、[M+K]+、[2M+H]+、[2M+Na]+、[M/2+H] + 3、加有缓冲溶液或溶剂的系统还可引进[M+X] +〔X=溶剂或缓冲溶液中的阳离子〕 如：用碱性系统方法解析常常有的加合离子有： [M+NH4] +〔我们的碱性系统用的 铵盐缓冲溶液〕〔用岛津仪器解析常常可见到的加合离子还有：[M+Na+X] +〕 4、假设有小于分子离子峰的碎片离子，要依照化合物结构来判断是否是其合理的碎 片，碎片 M1 所出碎片峰的 M S值应为 M1 或 M1+2〔出 M1 还是 M1+2 由断裂机理决定〕 5、同位素效应：一般带 Cl 或 Br 的样品，棒图中同位素效应比较明显〔见附图〕 ； 6、假设棒图中有不能够讲解的碎片或加合离子、且丰度较高，那么需要进行 NMR考据 c) M S棒图的判断〔负离子检测〕 ： 1、MS谱图中分子离子峰的值应为：EM-1〔Exact Mass〕( 即[M-H] -) 2、加有缓冲溶液或溶剂的系统还可引进[M+X] - 〔X=溶剂或缓冲溶液中的阴离子〕 3、其他常有合理加合离子及碎片离子同理正离子检测 二、LCMS解析方法的分类及其适用范围〔反相色谱〕 ： a) 从流动相系统划分，可分为：酸性方法和碱性方法 〔方法确定的原理：先依照化合物的结构算出其 ClogP 的值来大体确定其适用的分 析方法，假设计算出的方法不适合，再依照其谱图的详尽情况进行更正。 〕 一般来说：酸性方法适用于全局部化合物；老例样品平时用 10-80AB，极性较小的 样品能够考虑用 30-90AB或 50-100AB， 极性较大的样品能够选择 0-30AB或 0-60AB 碱性方法适用的情况为： 1、极性很大，用酸性方法〔0-30AB〕时出峰仍太靠前； 2、用酸性方法时出峰形状很宽，对称性不好； 3、用酸性方法时目标物在进样峰的地址即被冲出，形成以以下列图所示的双峰； 4、有些物质在酸性系统易成盐、不牢固，也会形成如上图所示的情况 5、负离子检测一般在碱性系统中进行 b) 从质谱〔MS〕D 的检测离子的极性划分，可分为：正离子方法和负离子方法 一般来说： 正离子方法适用于全局部化合物； 而羧酸、醛以及羧醛等结构的样品一 般在正离子方法中电离不好，那么需换用负离子方法来进行解析。 c) 从大气压电离质谱 〔API-MS〕电离模式划分， 可分为：〔气动辅助〕电喷雾〔API-ES〕、 大气压化学电离〔APC〕I 、大气压光致电离〔APPI〕 一般来说：ESI 源适合于全局部有极性的、含杂原子的化合物；若是样品在 ESI 源 下电离很弱〔紫外吸取相对较强〕 ，且分子量相对较小、拥有必然的挥发性、是热 牢固化合物，能够选择更换 APCI源及 APPI源来进行解析。 附图：