医学免疫学（第4版）第十八章 免疫学检测.pptVIP

第一节 抗原或抗体的体外检测 （三）免疫标记技术 3. 放射免疫测定法（radioimmunoassay , RIA） 是用放射性核素标记抗原或抗体进行免疫学检测的技术，包括液相和固相两种检测方法。 4.免疫胶体金技术 是用胶体金颗粒标记抗体或抗原，用以检测未知抗原或抗体的技术，可用于多种液相免疫测定和固相免疫分析。 第一节 抗原或抗体的体外检测 胶体金免疫层析双抗夹心法试验（早孕诊断试纸）原理示意图 第一节 抗原或抗体的体外检测 （三）免疫标记技术 5. 化学发光免疫分析 是将发光物质（如鲁米诺、吖啶酯）标记抗体或抗原进行反应，以发光现象作为指示系统，定量检测抗原或抗体的分析方法。 化学发光免疫分析原理示意图 第一节 抗原或抗体的体外检测 （三）免疫标记技术 6. 免疫印迹法 是将高分辨率凝胶电泳与固相免疫技术相结合，即将通过电泳区分开的蛋白质成分转移至固相载体（硝酸纤维素膜）后，再用酶免疫、放射免疫或化学发光免疫等技术进行检测的一种方法。 免疫印迹法示意图 第一节 抗原或抗体的体外检测 （三）免疫标记技术 7. 免疫组织化学技术 是指用标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项免疫检测方法。 免疫组织化学染色结果示意图 第二节 免疫细胞及其功能检测 第十八章 免疫学检测 目录 外周血单个核细胞的分离 淋巴细胞及其亚群的分离 淋巴细胞表面标志检测及细胞计数 免疫细胞功能测定 第二节 免疫细胞及其功能检测 第二节 免疫细胞及其功能检测 一、外周血单个核细胞的分离 常用的分离方法是葡聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法。 分离外周血单个核细胞示意图 第二节 免疫细胞及其功能检测 二、淋巴细胞及其亚群的分离 1. 玻璃黏附法 2.免疫吸附分离法（洗淘法） 3. 免疫磁珠分离法：免疫磁珠由抗淋巴细胞表面标志的抗体与磁性微珠交联结合组成，将其加入细胞悬液中后，可使表达相应表面标志的淋巴细胞与之结合。然后在磁场作用下，通过阳性和阴性分选获得某些特定细胞，目前得到广泛应用。 第二节 免疫细胞及其功能检测 二、淋巴细胞及其亚群的分离 4. 流式细胞术（flow cytometry，FCM）分离法：流式细胞术是借助荧光激活细胞分类仪（简称流式细胞仪）将荧光抗体标记的细胞进行鉴定和分选的技术。除分选细胞外，流式细胞仪还用于： （1）定量分析鉴定活细胞表面或胞内表达的特异分子； （2）免疫细胞分类和百分计数； （3）白血病和淋巴瘤的免疫学分型； （4）细胞周期和细胞凋亡检测。 第二节 免疫细胞及其功能检测 三、淋巴细胞表面标志检测及细胞计数 细胞表面标志目前多数都以CD命名。流式细胞术已成为淋巴细胞分类、计数的常用方法。 1．T细胞的表面标志检测： CD3+细胞代表成熟T淋巴细胞 CD3+CD4+细胞代表Th细胞 CD3+CD8+细胞代表 CTL 细胞表面标志检测流式图 第二节 免疫细胞及其功能检测 三、淋巴细胞表面标志检测及细胞计数 2．B细胞的表面标志检测 膜表面免疫球蛋白（mIg)为B细胞所特有,是鉴定B细胞的可靠指标。 3．自然杀伤细胞的表面标志检测 目前多以CD3+CD16+CD56+作为NK细胞的典型标志。 第二节 免疫细胞及其功能检测 四、免疫细胞功能测定 （一）T淋巴细胞功能测定 1．T细胞增殖试验 检测淋巴细胞增殖反应的常用方法包括： （1）3H-TdR掺入法 （2）MTT法 2．细胞分泌功能测定 借助ELISA和PCR等方法检测T细胞分泌细胞因子水平可分析细胞的状态；也可用ELISPOT法检测某一细胞亚群细胞因子产生情况。 第二节 免疫细胞及其功能检测 3H-TdR掺入法示意图 第二节 免疫细胞及其功能检测 四、免疫细胞功能测定 （二）B淋巴细胞功能测定 1．血清免疫球蛋白含量测定 常用ELISA、免疫比浊法等。 2．抗体形成细胞测定试验 （溶血空斑试验） 检测产生抗体的B细胞数量。 3．酶联免疫斑点试验 检测产生抗体的B细胞数量。 溶血空斑形成试验示意图 第二节 免疫细胞及其功能检测 四、免疫细胞功能测定 （三）细胞毒试验 用于检测细胞毒性T细胞（CTL）和NK细胞对某些靶细胞产生杀伤作用。常用检测方法有： 1. 51Cr释放法 2. 乳酸脱氢酶释放法 3.凋亡细胞检测法 常用形态学检测法，琼脂糖电泳法，流式细胞术 。 第二节 免疫