用于Pacbio平台的DNA大片段文库构建方法和试剂盒发明专利.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 107794575 A (43)申请公布日 2018.03.13 (21)申请号 201710962325.1 (22)申请日 2017.10.16 (71)申请人 深圳华大基因股份有限公司 地址 518083 广东省深圳市盐田区洪安三 街21号华大综合园7栋7层-14层 (72)发明人 马倩倩　钟宏彬　梁浩　唐玉婧　 安莹　 (74)专利代理机构 深圳鼎合诚知识产权代理有 限公司 44281 代理人 彭家恩　罗瑶 (51)Int.Cl. C40B 50/06(2006.01) C12Q 1/6869(2018.01) 权利要求书1页 说明书8页 序列表1页 附图4页 (54)发明名称 用于Pacbio平台的DNA大片段文库构建方法 和试剂盒 (57)摘要 本申请公开了一种用于Pacbio平台的DNA大 片段文库构建方法和试剂盒。本申请用于Pacbio 平台的DNA大片段文库构建方法，包括对打断的 DNA大片段进行ExoVII酶处理；然后依序进行第 一次DNA损伤修复、末端修复处理和加接头处理、 外切酶ExoIII和ExoVII双酶切处理；然后，采用 核酸电泳和片段回收系统对双酶切处理的产物 进行片段分选；对片段分选产物进行第二次DNA 损伤修复，即获得适用于Pacbio平台的DNA大片 段文库。本申请的DNA大片段文库构建方法，整个 建库过程无需使用Pacbio建库试剂盒，大大降低 A 了建库成本，为第三代测序和Pacbio核酸测序平 5 台的推广应用奠定了物质基础。 7 5 4 9 7 7 0 1 N C CN 107794575 A 权　利　要　求　书 1/1页 1.一种用于Pacbio平台的DNA大片段文库构建方法，其特征在于：包括对打断的DNA大 片段进行ExoVII酶处理； 对ExoVII酶处理产物进行第一次DNA损伤修复； 对第一次DNA损伤修复的产物进行末端修复处理和加接头处理； 对加接头的产物进行外切酶ExoIII和ExoVII双酶切处理； 采用核酸电泳和片段回收系统对外切酶ExoIII和ExoVII双酶切处理的产物进行片段 分选； 对核酸电泳和片段回收系统的片段分选产物进行第二次DNA损伤修复，即获得适用于 Pacbio平台的DNA大片段文库。 2.根据权利要求1所述的DNA大片段文库构建方法，其特征在于：所述ExoVII酶处理、第 一次DNA损伤修复、末端修复处理、加接头处理、双酶切处理、片段分选、第二次DNA损伤修 复，每个处理之后都包括核酸纯化步骤，然后再进入下一个处理。 3.根据权利要求2所述的DNA大片段文库构建方法，其特征在于：所述核酸纯化步骤采 用磁珠纯化。 4.根据权利要求1-3任一项所述的DNA大片段文库构建方法，其特征在于：所述加接头 处理中，接头序列为Seq  ID No.1所示序列， Seq  ID No.1：5’-atctctctcttttcctcctcctccgttgttgttgttgagagagatt-3’。 5.根据权利要求1-3任一项所述的DNA大片段文库构建方法，其特征在于：所述ExoVII 酶处理之前，还包括对核酸样品进行DNA打断处理，所述DNA打断处理具体包括，将核酸样品 放入g-Tube管，在Eppendorf Mini