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草果酚酸的提取工艺优化 摘要：目的：优化草果酚酸的提取工艺。方法：以乙醇体积分数、液料比、提取时间为考察因素，原儿茶酚酸和香草酸的总含量为响应值，采用Box-Behnken设计-响应曲面法优化草果酚酸的提取工艺并验证。结果：最优提取工艺为乙醇体积分数65%，液料比4∶1(mL/g)，提取时间2.5 h。经3次实验验证，原儿茶酚酸和香草酸的平均总含量为12.32 mg/g(RSD=0.26%,n=3)，与预测值（12.63 mg/g）的平均相对误差为2.45%。结论：优化所得工艺稳定、可行。 草果又名草果仁、草果子、老寇，始载于《宝庆本草折衷》现代药理研究表明，草果主要含有挥发油、黄酮类、酚酸类、甾体类、萜类和二苯庚烷类等成分Box-Behnken设计-响应曲面法能直观反映各影响因素之间的交互关系，快速获取最优工艺各因素的水平，已被广泛用于中药提取工艺的优化1 材料1.1 主要仪器本研究所用的主要仪器包括Agilent InfinityⅡ1260型HPLC系统及配备的G7111A型高压四元泵带真空脱气机、G7129A型自动进样器、G7114A 1260 VWD型检测器、LC-1260型2.4.0.628色谱工作站（美国Agilent公司），BI-800A型拜杰多功能粉碎机（德清拜杰电器有限公司），ME204型万分之一分析天平[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]，IKA HB10型旋转蒸发仪（上海万捷科技有限公司）等。1.2 主要药品与试剂原儿茶酚酸对照品（批号DST191102-081，纯度≥98%）、香草酸对照品（批号DST190706-088，纯度≥98%）均购自成都德斯特生物技术有限公司，甲醇（美国Sigma公司）为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为蒸馏水。草果药材（批购自四川新绿色药业科技发展有限公司，经成都医学院药学院李羿教授鉴定为姜科豆蔻属多年生草本植物草果A.tsaoko Crevost et Lemaire的干燥成熟果实。2 方法与结果2.1 草果酚酸的提取取草果药材粉碎（过二号筛），精密称取粉末10 g，置于圆底烧瓶中，按一定的液料比（5∶1,m L/g）加入65%乙醇，加热回流提取2次，每次1.5～2.5 h，滤过，合并滤液，浓缩蒸干得浸膏；浸膏加浓氨水充分溶解后滤过，滤液用浓盐酸（36%～38%）调p H至2～3，再用乙酸乙酯萃取2次，每次120 m L，合并两次乙酸乙酯萃取液，浓缩蒸干，即得草果酚酸粗品（每克粗品相当于草果生药102.60 g）。2.2 原儿茶酚酸和香草酸的含量测定2.2.1 色谱条件以Eclipse Plus C2.2.2 对照品溶液的制备精密称取原儿茶酚酸、香草酸对照品各适量，分别置于5 m L棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得质量浓度均为0.8 mg/m L的单一对照品溶液。量取上述各单一对照品溶液适量至同一棕色量瓶中，加甲醇稀释，摇匀，制得原儿茶酚酸、香草酸质量浓度分别为0.096、0.128 mg/m L的混合对照品溶液。2.2.3 供试品溶液的制备取“2.1”项下草果酚酸粗品适量，置于5 m L棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，即得供试品溶液。2.2.4 阴性对照溶液的制备按“2.1”项下方法制备不含草果药材的阴性样品，并按“2.2.3”项下方法制得阴性对照溶液。2.2.5 系统适用性试验取上述混合对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各适量，按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。结果，在该色谱条件下，原儿茶酚酸、香草酸的保留时间分别约为5.1、11.9 min，分离度分别为10.00、2.53，理论板数分别为1 919、4 636；阴性对照对待测成分的测定无干扰，详见图1。2.2.6 线性关系考察分别精密吸取“2.2.2”项下各单一对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1 m L，置于5 m L棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得相应质量浓度的系列对照品溶液。取上述系列对照品溶液各适量，按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。以各待测成分的进样量（X，μg）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归。结果，原儿茶酚酸的回归方程为Y=1 483.3X-81.705(r=0.999 5），香草酸的回归方程为Y=3 182.3X-84.938(r=0.999 4）。表明，原儿茶酚酸和香草酸检测进样量的线性范围均为0.16～1.60μg。2.2.8 重复性试验取“2.1”项下草果酚酸粗品适量，共6份，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并按标准曲线