亲水作用色谱.docxVIP

精品word可编辑 精品word可编辑 精品word可编辑 亲水作用 色谱〔HILIC〕是近年来色谱领域争辩的热点之一。本文简介了HILIC的起源、定义、分别特点；比较了HILIC和反相色谱〔RPLC〕的选择特性，争辩了HILIC与质谱联用技术的特点，并对其使用中的 留意事项进行了总结。1. HILIC的概念亲水色谱〔HILIC〕是一种用来改善在反相色谱中保存较差的强极性物质保存行为的色谱技术。它通过接受强极性固定性，并且结合高比例有机相/低比例水相组成的流淌相来实现这一目的。而这样的流淌相组成尤其有利于提高电喷雾离子化质谱〔ESI-MS〕的灵敏度。2. HILIC的分别机制HILIC的分别机理在目前还存在着争议，主要包括以下三个方面：〔1〕安排机理〔2〕离子交换〔3〕偶极-偶极相互作用。更多的试验现象那么说明HILIC的保存机理包含氢键作用、偶极作用和静电作用等多种次级效应，很难将其区分开来。 3.HILIC影响保存的主要因素普遍认为HILIC保存行为受到多种参数的影响，如固定相的官能团、有机改性剂的含量、流速、柱温、流淌相缓冲体系的pH值、缓冲盐的种类和浓度。??影响样品在固定相上的保存行为的最主要因素都是流淌相中有机相的比例，例如乙腈的含量的增加会显著增加样品的保存因子。在HILIC分别模式中，溶剂洗脱力量由弱到强为：四氢呋喃丙酮乙腈异丙醇乙醇甲醇水, 流淌相中水是最强的洗脱溶剂。一般接受乙腈-水体系作为流淌相，其中水相的比例为5%-40%以保证其显著的亲水作用。如图1所示，将流淌相中的水相用甲醇、乙醇、异丙醇代替，随着流淌相极性的减小，待测物在柱上的保存就会增加。Figure 1. HILIC retention as a function of polar modifier. 100 mm length ACQUITY UPLC BEH HILIC column. Peaks: 1 = methacrylic acid, 2 = cytosine, 3 = nortriptyline, 4 = nicotinic acid. 4. HILIC与RP-HPLC的比较传统的反相色谱〔RPLC〕对强极性和亲水性的小分子物质的保存和分别力量较弱，通常流淌相需要接受高比例的水相才能实现其保存，然而高比例的水相见导致一系列问题，比方固定相的反浸润和ESI-MS灵敏度的下降。HILIC正好可以解决这些问题，它供给了一种与传统RPLC互补的保存方式，能够使在RPLC上保存较弱或没有保存的物质在HILIC柱上供给适宜的保存，如图2所示：Figure 2: Chromatograms comparing the retention of allantoin on Atlantis HILIC Silica and Atlantis dC18 columns. (a) Column: 50 mm×4.6 mm, 3-μm dp Atlantis dC18; mobile phase: 10 mM ammonium formate, pH 3; Shows no retention (k =0) of allantoin. (b) Column: 50 mm×4.6 mm, 3-μm dp Atlantis HILIC Silica; mobile phase: 95:5 (v/v) acetonitrile–water containing 10 mM ammonium formate, pH 3; Shows retention (k =1) of allantoin. 另外，HILIC柱上的洗脱挨次与RPLC柱上的正好相反，极性较小的物质先出峰，极性较大的物质后出峰。如图3所示：Figure 3. Comparison of ESI+MS response using HILIC and RP conditions. SIR channels of acetylcholine (m/z 146.2) and choline (m/z 103.9); Columns: 100 mm×2.1 mm, 1.7μm (A) ACQUITY UPLC BEH C18 (B) ACQUITY UPLC BEH HILIC. Peaks: 1 = acetylcholine, 2 = choline 5.HILIC与质谱技术联用? ?HILIC可为强极性和强亲水性的化合物供给适宜的保存。通过优化多个色谱参数，有利于实现目标组分和基质中干扰物质的分别，从而降低基质效应的影响；而含有高比例水溶性有机相的流淌相又有利于提高质谱离子化效率，进而提高质谱分析的灵敏度。? ?质谱响应在某种程度上是取决于流淌相中