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离子源——基质辅助激光解析电离 (MALDI) 第二十一页，共39页。 质量分析器——飞行时间 (TOF) 第二十二页，共39页。 MALDI-TOF MS （基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱） 第二十三页，共39页。 图1. 一个典型的质谱图 （横坐标为质荷比，即相对分子质量，纵坐标为各个肽段的相对含量，每个峰的数字代表了这个峰对应的肽段的质量） 第二十四页，共39页。 1234.5396 783.9147 375.2561 肽质量指纹谱（PMF） 胰酶消化 凝胶 蛋白质 数据库 ? 1 2 3 比较: 是否相同 ?? 质谱 3235.2256 多肽 已测得质 谱数据或理论 质谱 数据 第二十五页，共39页。 第二十六页，共39页。 蛋白质芯片 第二十七页，共39页。 酵母双杂交 第二十八页，共39页。 第一页，共39页。 第二篇 药学分子生物学应用 一、转录组与转录组学 二、转录组学在药学中的应用 第八章 药物转录组学 (pharmacotranscriptomics) 第二页，共39页。 转录组（transcriptome） 广义：指在某一生理条件下、一种细胞、组织、器官或生物体所能转录出来的所有RNA的总和，包括mRNA和非编码RNA。 狭义：指所有mRNA的集合。 转录组学（transcriptomics） 在整体水平研究细胞中基因转录情况及其调控规律的学科。 研究方法：基因芯片技术、SAGE （基因表达系列分析）、MPSS（大规模平行信号测序系统）、 RNA测序 第三页，共39页。 一、药靶候选基因的鉴定 第二节 转录组学在药学中的应用 二、反义药物和siRNA药物 包括：反义DNA、 反义RNA、 核酶 反义药物：通过与靶DNA 或 mRNA 互补杂交，阻止或抑制靶基因表达，发挥治疗作用的药物。 第四页，共39页。 反义药物特点: 　　 新的化学物质（核酸）； 新的药物受体（DNA或mRNA）； 新的结合方式（碱基配对 ）；新的结合后反应（降解靶RNA）。 第一个反义药物：福米韦生 (fomivirsen) 1998年，美国FDA批准，由21个硫代脱氧核苷酸组成。通过抑制人类巨细胞病毒（CMV）mRNA发挥抗病毒作用。 　　 第五页，共39页。 siRNA药物 根据RNA干扰原理设计出来的小干扰RNA，通过诱导同源mRNA降解，有效阻断基因表达，起到治疗疾病效果。 VEGF可促进湿性老年性黄斑变性（wet-AMD）眼中新血管的生长，使血液渗漏进人眼内，从而导致视力丧失。 OPKO公司开发出Bevasiranib（siRNA药物），抑制VEGF表达，治疗AMD。 基因失活性治疗 第六页，共39页。 第二篇 药学分子生物学应用 第九章 药物蛋白质组学 (Phamacoproteomics) 一、概述（概念、分类、主要技术） 二、药物蛋白质组学及应用 第七页，共39页。 一、蛋白质组学(proteomics) 蛋白质组 (Proteome)： 一种细胞、某一特定组织或个体所表达的全部蛋白质。 蛋白质组学 (Proteomics)：从整体水平研究蛋白质组成、表达水平、翻译后修饰、相互作用的学科。 第八页，共39页。 第九页，共39页。 二、蛋白质组学分类 1. 表达蛋白质组学：比较正常样品与病理样品、药物治疗前后样品的蛋白质表达或修饰差异。 2. 结构蛋白质组学：分析蛋白质或复合体结构、定位 3. 功能蛋白质组学：研究蛋白质功能 第十页，共39页。 基因组-转录组-蛋白质组 DNA (Genome) RNA (Transcriptome) Proteins (Proteome) DNA sequencing Whole genome Microarray 2DMS/MS ? 第十一页，共39页。 四、蛋白质组学主要研究技术 1、蛋白质分离 双向凝胶电泳技术 2、蛋白质鉴定 生物质谱 3、蛋白质-蛋白质相互作用 蛋白质芯片、酵母双杂交 第十二页，共39页。 双向凝胶电泳技术 第十三页，共39页。 双向凝胶电泳技术 第十四页，共39页。 双向凝胶电泳技术 第十五页，共39页。 Sample (a) Sample (b) Sample (c) Present in (a) and (c) not (b) Present only in (a) Stronger in (b) than (a) or (c) 双向凝胶电泳图像分析 第十六页，共39页。 荧光差异显示双向电泳 (2D-DIGE) 第十七页，共39页。 关 键 问 题： 如何鉴定双向电泳分离出来的蛋白质？ 第十八页，共39页。 质 谱 分 析 质谱：是将被测物