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枸杞延缓小鼠皮肤老化的实验研究 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：枸杞延缓小鼠皮肤老化的实验研究 1 1 材料 2 2 方法 3 23 生化指标的测定 3 3 结果 4 31 皮肤SOD 、MDA含量 4 32 皮肤HOP含量及胶原蛋白含量 4 4 讨论 4 文2：枸杞多糖与丹参酮延缓小鼠皮肤衰老的实验研究 6 1 材料与方法 7 2 结果 9 3 讨论 9 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 12 正文 枸杞延缓小鼠皮肤老化的实验研究 文1：枸杞延缓小鼠皮肤老化的实验研究 皮肤老化是整个机体衰老在皮肤上的反应，随着年龄的增加，衰老的最直观的变化即为皮肤。皮肤衰老不仅有损于美容，且与许多皮肤病如脂溢性角化、日光性角化、基底细胞癌、鳞状细胞癌的发生也有着病因学的关系。因此，预防和延缓皮肤衰老已成为生命 科学 研究的热点之一。本研究观察了外用枸杞水煎剂对D半乳糖所致亚急性衰老模型小鼠皮肤的作用，为中医药化妆品 发展 提供基础资料。 1 材料 11 药品外用枸杞水煎剂的制备: 取宁夏枸杞子100g，用四分法将其缩减至50g，60℃干燥后粉碎，称取40g粉末加10倍量80%乙醇冷凝回流提取2次，每次1h（保持微沸），8层纱布过滤；将药渣加8倍量水继续冷凝回流提取3次，每次1h（保持微沸），收集滤液；合并3次滤液，于旋转蒸发仪上浓缩至50ml。分别取一定量稀释至所需浓度(1%、10%、20%、40%、80%)，加入一定量的氮酮（Azone）使氮酮浓度达到3%，备用。SOD、MDA、HOP试剂盒、考马斯亮蓝液均购于南京建成生物研究所;D半乳糖购于amresco公司;宁夏枸杞购于辽西国药店;其它试剂均为国产分析纯。 12 实验动物昆明小白鼠80只月龄，雌雄各半，体重26～30g，购自辽宁医学院实验动物中心。 13 仪器UV751GD型紫外可见分光光度计（上海欣益仪器仪表有限公司）；脱水机、包埋机、切片机、染色机（英国SHANDON公司） ；旋转蒸发仪RE52（上海安亭 电子 仪器厂）；FDV高速风选式超细粉碎机（ 台湾 佑崎机械制造公司）；高速离心机（上海手术仪器厂）；电热恒温水浴箱（北京光明医疗仪器厂）；XHB型旋涡混匀器（姜堰市康健医疗器具有限公司）；BS223S型电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司） 2 方法 21 实验动物分组昆明小白鼠随机分成8组，每组10只，自由食水1w后, 背部剃毛2×2cm区域，以后每5天剃毛一次。按照表1给予处理因素,连续50d。 表1 实验动物分组（略） 22 取材末次给药后将受试区域的被毛彻底剃干净，乌拉坦(/kg)麻醉取皮肤。 23 生化指标的测定 231 皮肤SOD 、MDA含量的测定 0℃的生理盐水中去除皮下脂肪，滤纸拭干，按1：9的比例制生理盐水相皮肤匀浆液，3000rpm离心15min，取上清备用，按试剂盒说明进行操作。 232 皮肤HOP含量的测定 乙醚消化皮下脂肪，滤纸拭干，按照试剂盒说明，碱水解法测皮肤HOP含量。 24 组织学观察取受试皮肤，10％福尔马林固定，常规石蜡切片，HE染色，普通显微镜下进行组织学观察。 25 数据处理数据以均数±标准差表示，组间比较用单因素方差分析。 3 结果 31 皮肤SOD 、MDA含量 表2 皮肤SOD 、MDA含量（略） 注：与对照组比较, #P；与衰老组和氮酮组比较,*P，**P。 32 皮肤HOP含量及胶原蛋白含量 表3 皮肤HOP含量及胶原蛋白含量（略） 注：与对照组比较, #P；与衰老组和氮酮组比较,*P，**P 图1 对照组 （×400）（略） 图2 衰老组（×400）（略） 图3 给药Ⅲ组（×400）（略） 33 皮肤形态学观察衰老组(图2)与对照组(图1)比较，胶原纤维染色减弱，纤维变细且排列稀疏，表明胶原纤维合成减少；表皮厚度变薄，角质层变厚。给药Ⅲ组(图3)与衰老组(图2)比较，胶原纤维合成较模型组明显增加，表皮厚度增厚，角质层变薄；真皮层成纤维细胞数量增加。 4 讨论 老年动物饲养周期长，个体差异大，不易获得。而青年小鼠长期注射D半乳糖，由于其代谢产物半乳糖醇不能被进一步代谢而堆积在细胞内，影响渗透压，导致细胞肿胀，代谢紊乱，体内活性氧水平升高，细胞脂质受损，以致产生机体多器官、多系统的功能减退，这些变化均与老龄小鼠相似。故本实验采用了D半乳糖所致的小鼠衰老模型［1］。由表2、表3可知，连续颈部注射D半乳糖50d后,其皮肤SOD值与对照组比较明显降低(P),MDA值与对照组比较明显升高(P);胶原蛋白含量明显增