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辐射诱发正常淋巴细胞和髓性白血病细胞旁效应 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：辐射诱发正常淋巴细胞和髓性白血病细胞旁效应 1 1 材料与方法 2 2 结果 4 3 讨论 5 文2：辐射诱导的正常组织纤维化的细胞和分子机制 7 1 成纤维细胞系统 7 2 纤维化是多个细胞因子参与的细胞间相互作用的结果 9 3 辐射诱导纤维化的防护研究展望 11 参考文摘引言： 12 原创性声明（模板） 13 文章致谢（模板） 14 正文 辐射诱发正常淋巴细胞和髓性白血病细胞旁效应 文1：辐射诱发正常淋巴细胞和髓性白血病细胞旁效应 电离辐射诱发旁效应在20世纪90年代初期首先被Nagasawa H等［1］报道。他们研究发现，用α粒子照射只有1%的细胞，结果有30%～50%的细胞发生了姊妹染色体互换，这一发现也被以后的许多学者陆续证实，并且对旁效应现象的发生机制做了大量的研究，进一步证实辐射诱发旁效应主要是通过受照射损伤细胞分泌细胞因子，以及与细胞之间的缝隙联结细胞间通讯有关［2，3］。但是对于旁效应的实验研究，使用肿瘤细胞的实验较多，本文将采用正常人的淋巴细胞系和慢性髓性白血病细胞系，利用低传能线密度的60Coγ射线中等剂量照射，观察两种细胞系在辐射诱发旁效应间之间是否存在区别。 1 材料与方法 材料 细胞系 正常人淋巴（NL）细胞系，由本所放射生物研究室自行传代建立的正常男性淋巴细胞系；人慢性髓细胞白血病（K562）细胞系，也是国内实验室一直使用的细胞系，由本所毒理实验室提供。 照射 60Coγ射线照射，吸收剂量率为/min，照射技术及照射条件由本所二级标准实验室提供。 凋亡细胞检测 凋亡细胞检测试剂盒由北京宝赛生物技术有限公司生产。流式细胞仪由美国BD公司生产，型号为FACS Aria,所用的软件FACS Diva。 方法 细胞培养 两种细胞相同条件下培养，用RPM 1640培养液，加10%胎牛血清，37℃、5%CO2培养，隔天换培养液1次，细胞生长良好后，更换培养液后次日照射，细胞数约为1×106左右，25cm2培养瓶加入5ml培养液。 照射条件 实验用60Coγ射线照射一次照射，分两次照射（×2），照射后立即放回37℃培养箱继续培养；二次照射的细胞，2h后，按同样方法处理。 细胞分组 将NL和K562两种细胞分别进行一次照射、分次照射（×2），各分为7组，未照射的正常对照组，细胞和培养液完全照射组，提取培养液照射组（照射后的细胞悬液在60min内，用10ml注射器吸出，连接在μm过滤漏斗过滤细胞，将照射的培养液加入到未经照射的细胞中）和50%细胞和培养液（照射的细胞悬液等比例加入到未照射的细胞悬液中）照射组，37℃、5%CO2培养箱继续培养。 凋亡细胞检测 分别于照射后的24、48和72h进行凋亡细胞检测，检测方法按照Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒的说明书进行操作，调整细胞浓度至1×１０6左右，PBS洗2次，低温低速离心10min，用尼龙布过滤，尽量使细胞悬液中的细胞成单个细胞，将细胞悬浮于缓冲液中，上机前30min加入荧光探针（Annexin V-FITC)和碘化丙啶（propidium iodide)染料，闭光4℃反应30min后加入缓冲液（binding buffer),充分振荡混匀上机检测，用软件FACS Diva 计算 凋亡细胞率，为了避免其他混杂因素，本次实验只计数早期凋亡细胞率，除去晚期凋亡细胞和死亡细胞。 该实验在相同条件下重复2次，每个检测点检测3瓶细胞，求出3次检测早期凋亡细胞率的平均值。 数据统计分析 各组凋亡细胞发生率采用照射组与未照射组之间进行比较，一次照射和（×2）分两次照射之间比较，以及两种细胞系凋亡细胞发生率，采用相同照射条件组之间比较，都采用t检验。50%细胞照射组凋亡细胞发生率的预期值的计算是用完全照射组凋亡细胞发生率加上正常对照组凋亡细胞发生率后，再除以2，计算50%细胞照射组凋亡细胞发生率的预期值。 2 结果 细胞照射后不同时间，取出不同组的细胞，经过前处理后上机，检测凋亡细胞发生率，观察在照射后不同时间凋亡细胞发生率。 NL细胞 照射后，24和48h，早期凋亡细胞发生率各组与对照组相比都有所增加，特别是提取照射细胞的培养液组在照射后24h和48h与未照射的对照组比较差异有显著性；各时间点的50%细胞照射组早期凋亡细胞发生率都高于预期值（完全照射组凋亡细胞发生率的50%+未照射对照组凋亡细胞率的50%）；而72h后只有完全照射组显著高于未照射对照组；另外两组的凋亡细胞发生率与未照射的对照组间比较差异均无显著性。 正常人淋巴（NL）细胞×2照射后24h和48h凋亡细胞发生率都比