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阿魏酸钠抑制高糖诱导的系膜细胞增殖 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：阿魏酸钠抑制高糖诱导的系膜细胞增殖 1 1 材料与方法 2 2 结 果 4 3 讨 论 6 文2：阿魏酸钠对高糖诱导下原代系膜细胞增殖的影响 7 1 材料和方法 8 2 结果 10 3 讨论 11 参考文摘引言： 12 原创性声明（模板） 13 文章致谢（模板） 14 正文 阿魏酸钠抑制高糖诱导的系膜细胞增殖 文1：阿魏酸钠抑制高糖诱导的系膜细胞增殖 【Abstract】 Objective To investigate the effects and mechanism of sodium ferulate (SF)on the proliferation of mesangial cells induced by high glucose. Methods The primary glomerular mesangial cells were divided into normal, mannitol, high gloucose and high gloucose plus different concentration SF groups. Cells were collected at 24 and 48 h. Cell proliferation was measured by MTT assay, and cell cycle and cyclinD1 were measured through flowcytometry. p53 protein expression was detected by immunocytochemistry. Results High glucose significantly promoted mesangial cell proliferation and upregulated the expression of cyclinD1, and downregulated expression of p53 within 48 h. SF inhibited mesangial cell proliferation induced by high glucose with concentration and timedepended SF can inhibit proliferation of mesangial cells induced by high glucose by suppressing the cyclinD1 expression and increasing the level of p53 protein possibly. 【Key words】 Mesangial cells; High glucose; Sodium ferulate; CyclinD1; p53 糖尿病肾病(DN)的发病机制十分复杂，至今尚未完全阐明，但显著的高血糖和高尿糖应是引起DN的始动因素和中心环节〔1〕。肾小球系膜细胞(GMC)为肾小球固有细胞，有实验证实，高糖可刺激其活化进而增生，产生多种细胞因子和炎症介质，合成并分泌细胞外基质成分，导致肾小球硬化〔2，3〕，但也有不少研究认为高糖并没有促进GMC增殖而仅仅是肥大〔4，5〕。阿魏酸钠(SF)是一种非肽类内皮素拮抗剂，具有广泛的药理作用，已有作者用其 治疗 DN取得良好效果〔6〕，然而其作用机制未明。本研究拟用原代培养GMC，观察高糖培养环境中GMC细胞周期及p53和cyclinD1蛋白表达的变化以及SF对其影响，探讨SF的作用机制，为临床合理用药提供新的实验依据。 1 材料与方法 主要试剂及设备 SF(吉林西点药业科技 发展 股份有限公司，批号：)；甘露醇(石家庄四药有限公司)；MEM培养基(美国Gibco公司)；L谷氨酰胺、4甲基偶氮唑蓝(MTT)、二甲基亚砜(DMSO)、胰蛋白酶(美国Sigma公司)；胎牛血清(FCS，Hyclone)；抗cyclinD1抗体、p53抗体、SABC试剂盒(武汉博士德)。CO2孵箱(美国REVCO)；倒置显微镜(OLYMPUS)；酶标仪(美国BioRad)；流式细胞仪(美国BD)；CM2000B型生物医学图象分析系统(北航) 方法 大鼠原代GMC培养 大鼠双肾灌洗后，分级筛网滤过分离肾小球，并用Ⅳ型胶原酶消化处理，种植法体外培养大鼠肾小球系膜细胞。培养细胞按已建立的方法鉴定〔7〕，确定为系膜细胞，供实验用。 实验分组 正常组( mmol/L D葡萄糖)；SF+正常组(SF240