氯沙坦对糖尿病大鼠肾组织细胞外基质基因表达影响的研究临床医学.docVIP

氯沙坦对糖尿病大鼠肾组织细胞外基质基因表达影响的研究临床医学 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：氯沙坦对糖尿病大鼠肾组织细胞外基质基因表达影响的研究临床医学 2 1 材料与方法 2 2 结 果 3 3 讨 论 4 文2：中药复方活血通对糖尿病大鼠肾组织晚期糖基化终产物影响的研究临床医学 5 1.材料 6 (1)动物 6 (2)试剂与药品 6 (3)实验仪器 6 2.方法 6 (1)动物模型的建立 6 (2)动物分组及处理 7 (3)指标检测 7 3.统计学分析 7 1.动物饲养情况观察 8 3.各组动物体重及肾重/体重比较 8 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 12 正文 氯沙坦对糖尿病大鼠肾组织细胞外基质基因表达影响的研究临床医学 文1：氯沙坦对糖尿病大鼠肾组织细胞外基质基因表达影响的研究临床医学 糖尿病肾病(DN)是糖尿病(DM)主要的微血管并发症之一，如何阻止与延缓其发生、 发展 ，已成为DM研究的重点。细胞因子在DN发病中的作用越来越得到人们的关注。为此本研究利用血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1)拮抗剂氯沙坦对DM大鼠肾组织转化生长因子β1(TGFβ1)、纤维连接蛋白(FN)和Ⅳ型胶原(COLⅣ)mRNA表达的作用进行研究，以期进一步探讨其可能的作用机制。 1 材料与方法 动物分组和模型建立 SD大鼠30只(体重160～180 g，雌雄各半)，购自郑州大学医学实验动物中心，随机分为3组，每组10只：正常对照组(对照组);DM组：链脲佐菌素(STZ，Sigma公司)70 mg/kg腹腔注射，48 h后尾静脉采血测定血糖≥ mmol/L者确定为DM大鼠;氯沙坦干预组(氯沙坦组)：DM模型确定后第2天给予氯沙坦30 mg·kg-1·d-1灌胃，对照组和DM组给予等量的生理盐水灌胃，实验期间所有大鼠自由饮水，标准饲料不使用胰岛素和其他降糖药。 标本采集和检测 于实验第2、4、8 w各组随机取10只大鼠，用代谢笼收集24 h尿液，采用免疫散射比浊法检测尿白蛋白(试剂北京九强生物工程公司)。之后禁食10 h，20%乌拉坦麻醉后由腹主动脉采血，3 000 min离心5 min分离血清，用美国BeckmanCoulter公司CX9全自动生化分析仪检测血糖、尿素氮、肌酐。肾脏肥大指数以肾重/体重(g/kg)比值表示。留取肾脏标本用生理盐水漂洗后，保存于液氮中待提取总RNA。 引物设计和RTPCR检测 取肾皮质100 mg加液氮研碎后，用Trizol(美国Gibco公司)提取总RNA。根据A260/A280值 计算 RNA的浓度和纯度。TGFβ1 mRNA上游引物为：5′AATACGTCAGACATTCGGGAAGCA3′，下游引物为：5′TCCACCACCCTGTTGCTGAC3′，扩增产物为498 bp，GAPDH上游引物为：5′ACCACAGTCCATGCCATCTA3′，下游引物为：5′TCCACCACCCTGTTGCTGAC3′,扩增产物为498 bp;Col Ⅳ mRNA上游引物为：5′GTGCGGTTTGTGAAGCACCG3′，下游引物为：5′GTTCTTCTCATGCACACTTC3′，扩增产物为363 bp;GAPDH上游引物为：5′CATGGTCTACATGTTCCAGT3′，下游引物为：5′GGCTAAGCAGTTGGTGGTGC3′，扩增产物为505 bp;FN mRNA上游引物为：5′CAGTTTGTGGAAGTGACCGA3′，下游引物为：5′TGGAGGTTAGTGGGAGCATA3′，扩增产物为272 bp，GAPDH上游引物为：5′ACCACAGTCCATGCCATCAC3′，下游引物为：5′TCCACCACCCTGTTGCTGTA3′，扩增产物为349 bp(以上 引物有上海生物工程公司合成)。PCR按逆转录二步法试剂盒(Invitrogen)进行操作，反应参数为：94℃ 60 s，58℃ 60 s，72℃ 120 s，共30个循环，产物用2%琼脂糖凝胶电泳，EB染色，并在UVP凝胶成像系统分析电泳带灰度。 统计学处理 计量资料用x±s表示，组间差异比较采用单因素方差分析，使用统计软件进行统计描述。 2 结 果 各组大鼠基本资料比较 实验第2、4、8周后，DM组血糖、尿素、24 h尿白蛋白、血肌酐均高于对照组差异显著(P)，而体重低于对照组(P);氯沙坦组尿白蛋白排泄虽能缓解，但尚不能恢复正常水平(P)。氯沙坦 治疗 后对其他指标无明显影响，DM组和氯沙坦组