基因工程的酶学基础PPT课件2.ppt

* * * Klenow 来源： E.coli DNA PolymeraseⅠ经蛋白酶水解的大片段(Klenow和Henningseon.1970) DNApolⅠ 枯草杆菌蛋白酶或胰蛋白酶 C端(76kd) + N端（36kd） 5’→ 3’外切 Klenow 5’→ 3’聚合 3’→ 5’外切 * Klenow 用途 填补限制酶的5′-粘性末端为平齐末端 5’…CC 3’…GGAATT 5’…CCTTAA3’ 3’…GGAATT5’ Klenow 3′-末端标记：Klenow 在无底物时只进行3′→ 5′外切；有底物存在时则聚合。 这种标记也称作交换标记，但Klenow作用不如T4DNA聚合酶。 * T4DNA聚合酶 来源：T4Phage感染的E.coli 结构：MW=114，000d 活性： 5′→3′聚合活性； 3′→5′外切活性，对单链活性大于双链DNA，外切酶活性比Klenow大200倍 用途 填补或标记限制酶切后产生的5′-粘性末端的3′-凹缺末端。（同Klenow） 3′-粘性末端的标记制备DNA探针,同 Klenow 末端标记。  * T7DNA聚合酶（测序酶） 来源：T7Phage感染的E.coli 结构：由2个蛋白亚基组成： T7phage gene5蛋白 + 宿主硫氧蛋白 活性： 5′→3′聚合，持续反应时间