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试管凝集反应标准比浊管配制 管号 抗原稀释液(ml) 生理盐水(ml) 透明度 标记 1 0.00 1.00 100% ++++ 2 0.25 0.75 75% +++ 3 0.50 0.50 50% ++ 4 0.75 0.25 25% + 5 1.00 0.00 0% - * 结果记录 根据各管中上层液体的清亮程度记录结果,特别是50%清亮度(++)对判定结果关系较大,一定要与比浊管对比判定 血清对照为清亮透明无沉淀,抗原对照为均匀混浊在两种对照管都成立的情况下,才可判定试验管,否则应重做。对沉淀需要经验判定。 * “+++” 几乎完全凝集,上清液75%清亮 “++”显著凝集,上清液50%清亮 “+” 微量凝集,液体25%清亮 “-” 无凝集,液体不清亮 确定每份血清滴度是以出现“++”及以上的凝集现象的最高血清稀释度 “++++”完全凝集,上清液100%清亮 * 诊断标准 没有进行过菌苗接种的人、畜血清试验的标准是: 人、牛、马、鹿、骆驼等大家畜血清为1:100( ++)及以上者为阳性,1:50(++)为可疑。 猪、羊(绵羊、山羊)、犬等小家畜血清在1:50(++)及以上者为阳性,1:25(++)为可疑。 对可疑反应的人和动物应在10-25天内重复检查,以便进一步确定诊断。 * 影响试验结果的因素及注意事项 受检血清应新鲜、无溶血、无污染,存放血清处温度不能超过10℃,采血后应于3—4日内进行检查,因放置时间过长可能会导致血清效价降低。 遵守操作规程:所用的器材要清洁、干燥,试剂的加量一定要正确,放入温箱的温度和时间都要按要求,否则都影响结果。每份血清和抗原均要有对照。 高渗盐水作凝集反应,一般浓度在10~12%,一般切记人血清不能用高渗盐水。 * 作凝集反应时,有个别血清会出现前带现象,即稀释度低的血清管内(或血清量多的格)不发生凝集,而稀释度高的管内(或血清量少的格)出现凝集,这叫做前带现象。如果某血清在平板凝集反应中出现了前带现象,那么做试管反应时应多做几个管,多采用几个稀释度。 氯化钠的含量增高对血清反应有明显的影响,盐的浓度越高,反应的敏感性提高,因此在兽医界为了克服凝集反应中的阻抑抗体的干扰,对羊血清采用高渗盐水作凝集反应,一般浓度在10~12%,切记一般人血清不能用高渗盐水。 * 前带现象产生的原因 ① 胶体粒子学说:血清稀释度低所含的胶体粒子多,它影响抗原抗体的结合,而稀释度高的则含胶体粒子少,所以出现凝集。 ② 不完全抗体学说:血清中因存在不完全抗体竞争抗原,所以在低稀释度的管中不凝集。 ③ 抗原抗体比例失调,也就是抗体过剩或血清内含有过多防腐剂,严重污染可造成前带现象的产生,封闭抗原的干扰。 * 评价 该方法特异性较好,敏感性也高,因此适用于检疫和临床诊断。 由于该试验有时出现前带现象和封闭现象,所以有时也出现假阴性结果,必要时和其它方法联合应用。 * 抗原抗体反应的特点 * 抗原抗体结合的特异性 抗原抗体结合的基础是抗原决定簇与抗体的抗原结合部位之间 的反应.这种反应是专一性的.例如:布氏杆菌只能与布氏杆菌抗体相结合,而不能与痢疾杆菌抗体相结合. * 抗原抗体 结合的表面性 抗原抗体的结合仅仅是分子表面的结合,虽然两者的结合相当稳定,但结合后的抗原抗体,其本身的结构,生物学活性均未遭到破坏,并且在一定条件下可解离.即抗原抗体的结合是可逆的,所以,解离抗原抗体复合物的方法可用于 提取,纯化抗原或抗体.
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