（参考课件）IPP 分析免疫组化图片.pptVIP

用IPP选取特定颜色区域 选择特定颜色的区域是IPP最有特色的功能，按照特定的颜色特征选取图象中的特定区域，并计算这些区域的面积等几何尺寸与光密度数据，就是IPP分析图像工作的中心任务。 Segmentation：适用于选取整张图片中具有特定颜色的所有区域。 Irregular AOI:手动选择待测区域的工具。 * Irregular AOI工具是手动工具。A:trace方式,手动或自动寻找区域边界 * B：Magic wand方式,定义一片特定灰度范围的区域。 * Segmentation工具：完全按照颜色标准来选取多个相同颜色的区域 * 3.2.5测量并导出统计结果数据 * 测量指标： 1.整张图片所有对象的IOD累加值（IOD SUM） 2.分析区域的面积（area SUM）。这个区域可以是整张图片的面积，也可以是图片中某个特定区域的面积（与测量IOD所用的区域可能不同）。 以Mean density ( IOD/area)作为分析指标。每张照片得到一个准确的测量值。 * 3.2.6记录宏操作 当一组照片的分析方法确定之后，下面的事情就是按照一个统一的程序一下一下地点鼠标进行死板的操作测量。很费时间。把这些死板的操作过程记录到一个宏操作中，以后只要运行这个宏操作就可以一下子完成前面的所有操作。既省力又省时，还不会出错。当你有上面张照片需要进行测量的时候，使用宏操作是非常需要的。 * 3.3免疫组化照片测量结果的统计分析 一张免疫组化照片一般能得到一个IOD或Mean density值。 一张组织切片一般应选择几个视野，拍摄三-十张照片。这样就有了数个IOD或Mean density值。 一个实验对象要作数个组织切片。 一组实验数据应包括数个实验切片。这个实验组就有了上百张照片，它们的IOD或Mean density值就构成了这个实验组的测量数据。可以用来进行统计分析。计算平均值与标准差，并与其他实验组或对照组进行t-检验等统计处理。 可见在进行免疫组化照片的数字化分析时，一般是要拍摄很多张照片的。 * 结语 免疫组化图片的数字分析只是免疫组化实验的一部分，从处理切片到拍摄照片到最后进行数字分析，每一步都能影响最后的分析结果。 本讲座的主题是介绍使用IPP软件来分析免疫组化图片的原理与方法。但对软件的具体操作步骤并未涉及，这是因为软件的操作比较繁琐，不亲自练习是不可能学会的。请参阅另外的指导教材及软件操作说明书。 谢谢大家！ * 这个区域是特定染色的区域。在计算IOD时能同时计算出来，但以此为平均面积往往并不正确。 * 对单个细胞的分析比较 单个细胞的IOD 单个细胞的mean density 照片上各细胞IOD或mean density的平均值 * 边界不清晰的贴壁细胞 整张图片IOD/细胞个数（照片中细胞数目不多，数起来不费事） * 细胞簇的分析 测量整张图片黄色区域IOD。 再测量细胞分布的区域面积 area。 对染成蓝色的细胞核计数，作为细胞数N。 以 IOD /（N ）作为统计指标。或IOD/area * 2.从图片上分析光密度方法 的技术进步 简单测量整张照片的光密度值。 在照片上随机选取数个区域，测量其光密度值。计算其平均值作为整张照片的光密度值。 在照片上准确选择被染上染料的特定颜色的区域，计算这些区域的累积光密度值（IOD），进而计算统计区域的平均光密度值。 * 2.1测定整张照片的光密度-图象分析仪 其测定原理有点象分光光度计，直接测定切片的整体光密度。 可以根据照片上象素点的亮度来区分测定区域 其缺陷是显而易见的。复染上的其他颜色的染料也会产生光密度吸收，导致严重的干扰。 * 2.2 抽样测量光密度 在彩色电子图片上选取目标颜色区域，抽样测量这些小区域的灰度值，取其平均值作为比较染色深浅的指标。 随机选取几个区域但是能作到“随机”吗？ * 2.3 ImagePro plus的独特优势。 准确地按照一个颜色标准来选取一个AOI (area of interesting ) 。测量这个区域的光密度参数。 * 使用IPP比前两种方法更好。 在查到文献中使用的图象分析方法是前两种的时候，完全可以用IPP的分析测量来代替。结果更加准确。不必照搬文献上所述的方法。随着计算机技术的发展，以后也许还会有更好的图象分析方法及图象分析程序的。 * 3.用IPP分析免疫组化图片的过程 拍摄样品照片。 选取图片上具有染料色调的区域（AOI，area of interesting）。 测量该区域的IOD。 选择并测量有效统计区域的面积 计算光密度平均值IOD/area（ mean density ） 计算同一实验组切片各照片的平均及标准差。