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HPLC法检测头孢呋辛钠含量验证方案 一、设计背景 头孢呋辛钠是第二代头孢菌素类抗生素药物，对革兰阳性菌和阴性菌均有较强的抑菌或杀菌作用，对β-内酰胺酶稳定。目前市场上应用较为广泛的抗生素药物，它能通过与细菌细胞膜上的青霉素的结合蛋白相结合，使转肽酶酰化，抑制细菌中隔和细胞壁的合成，导致细菌溶解和死亡。临床上与用敏感菌所致的下列轻、中度感染：上呼吸道感染（咽炎/扁桃体炎、中耳炎、急性鼻窦炎）。下呼吸道感染（急性支气管炎继发细菌感染和慢性支气管炎急性发作）。皮肤和软骨组织感染。用于肺炎。用头孢呋辛钠对于角膜炎消炎效果很好，一般采用静脉给药见效快。头孢呋辛钠在体内不会被肝脏代谢，以原形经肾脏排出体外，对人体的副作用非常小，过敏反应也极少见，对大多数人群都适用（如小孩、孕妇），也用于手术前后的预防感染等领域。综上所述，头孢呋辛钠具有杀菌活性强、抗菌谱广、 药物代谢良好、临床疗效显著、毒性低，适用人群广泛等优点。 二、设计依据 头孢呋辛钠（C16H15N4NaO8S）。白色结晶固体，易溶于水或缓冲溶液，溶于甲醇，极微溶于乙醇乙酯、乙醚、辛醇、苯或氯，具有旋光性，引湿性等。根据头孢呋辛钠具有的一些综合理化性质考虑，测定头孢呋辛钠的方法主要有微生物法、旋光法、紫外分光光度法和近红外光谱法等。但是其中大多数的测定方法都没有使头孢呋辛钠分离的能力,无法排除一些杂质的干扰,不能直观可靠的分辨出其中的有效成分，不利于监控注射用药物的使用安全性。所以依据《中国药典》第二部和第四部中的有关检验方法，我们建立了高效液相色谱法测定头孢呋辛钠的含量的检测方案。 三、设计方案 （一）仪器与试药 表一试药 试药名称 级别 入厂批号 批号 厂家 乙腈 色谱纯 202010701 64486 上海新科 三水合醋酸钠 分析纯 190426 - 珠海联邦 冰醋酸 分析纯 199401 - 珠海联邦 头孢呋辛对照 二级标准物质含量92.0% YW20042 10103 中国食品药品研究所 表二仪器 仪器名称 厂家 编号 型号 是否在有效期内 色谱柱 安捷伦科技（中国） US073324 BSKS-C8 是 PH计 山东博科 BS547336 PHSE407 是 HPLC 安捷伦科技（中国） AG74224 Agilent-20AT 是 电子天平 赛多利斯（德国） BDU354 XP204 是 紫外可见分光光度计 中科瑞捷 UV250046 UVZY205 是 水浴锅 上海理涛自动化科技 LT440023 BS504 是 （二）检测条件 1.检测波长：273nm 2.色谱柱：BSMMKSC85ul,250mm*4.6mm(辛烷基硅烷键合硅胶) 3.柱温：25℃ 4.流速：1.0ml/min 5.进样量：20ul 6.流动相：PH3.4醋酸盐缓冲液-乙腈（85;15)：取三水合醋酸钠0.68g，冰醋酸5.5mL，加水稀释成1000mL，用冰醋酸调节PH值至3.4与乙腈（85:15），混匀，过滤，即得。 （三）溶液的制备 1.系统适用性溶液∶称取头孢呋辛对照品(二级标准物质)约25mg，置 于50ml量瓶中，加水溶解，并稀释定容，置60℃水浴锅中放置 30min，放冷，使头孢呋辛部分转变为去氨甲酰头孢呋辛，作为系统适用性试验溶液。 2.对照品溶液∶称取头孢呋辛对照品约50mg，精密称定，置 50ml量瓶中，精密量取5ml至50ml 容量瓶中加水溶解，稀释并定容，摇匀，即得（0.1mg/ml）。自称取头孢呋辛对照品约50mg起，平行制备两份。（在进样器设置4℃条件下24小时内进样） （3）供试品溶液∶称取供试品约50mg，精密称定，置50ml量瓶中，精密量5ml至50ml容量瓶中，加水溶解，稀释并定容，摇匀，即得（0.1mg/ml）。自称取供试品约50mg起，平行制备两份。（在进样器置 4℃条件下24小时内进样） （四）方法学考察 1.专属性试验：取头孢呋辛钠50mg，置于100ml容量瓶经强酸强碱，110℃高温破坏，强光照射后产生的杂质或降解物能与主峰分离，表明HPLC法测定头孢呋辛钠含量的方法专属性良好。 2.精密度试验：取的头孢呋辛钠对照品溶液1份，按色谱条件连续迸样 5次, RSD值不大于2.0%，表明方法精密度良好。 3.稳定性试验：因为头孢呋辛对热不稳定，所以采用模拟临床用法，通过外观、PH值检查和含量测定，考察头孢呋辛钠在10％葡萄糖注射液、５％葡萄糖氯化钠注射液、0.9％氯化钠注射液、复方氯化钠注射液和５％碳酸氢钠注射液中的稳定性。若头孢呋辛钠在与五种注射液配伍后，外观及PH值无明显变化，含量均在98％以上，６小时内几乎无分解，则表明稳定性良好。 4.重复性试验：取配制供试品溶液六份，分别进样，记录色谱图，按外标法计算头孢呋辛钠无水状态百分含量。 5.线性关系考