银杏叶分散片中总黄酮醇苷的含量测定方案.docxVIP

银杏叶分散片中总黄酮醇苷的含量测定方案 一、设计背景 银杏叶是属于银杏类植物，该植物喜生长在向阳处，且土壤肥沃的地带，辽宁、浙江、贵州等等分布角度，该植物可用作医学要用，也是中药入药主要部位，有活血化瘀、通经止痛的作用。在银杏叶中可以提取到总黄酮醇苷，她属于黄酮类物质，是2-苯基色原铜结构化合物，提取总黄酮醇苷可实现抗菌防病的重要作用。银杏叶具有活血化瘀、敛肺平喘、化湿止泻的功效，在临床医学上主要用于治疗冠心病、咳喘病、高脂血症、心绞痛等疾病，不仅如此，银杏是最具经济价值的植物，现如今以银杏叶入药生产和销售生产相关药品的公司较多。截止到2018年，全国拥有多个规模较大以种植“银杏叶”基地提取产量有1.9亿元，种植面积为30万亩。可见，我国对银杏叶质量提取无论在生产和加工都是非常重要的，而总黄酮醇苷的提取又是银杏全产业链中的重要环节，它对于银杏叶的采收、加工及销售都具有非常重要的意义。在银杏叶中黄酮内酯的提取过程中，会受到温度、降水量、气候条件等因素影响，不同的环境和条件下其黄酮含量受到一定的影响。通过实验的方式对银杏叶中总黄酮含量进行提取，通过流速、水温、不同浓度进行有效的实验，以确保最大程度地保证银杏叶的质量和价值。 二、设计依据 经查阅“中国知网”相关的期刊文献资料及《中国药典》（2020年版）中的内容得知，目前，可用于银杏叶含量测定方法主要有紫外-可见分光光度法和高效液色谱法等。在研究中发现，紫外-可见分光光度法专属性较差，只适合用于测定稀溶液，制剂中的辅料对其测定的干扰较大，样品处理麻烦，仪器操作较复杂，测量结果不够准确。而高效液相色谱法具有操作简单、分离效果好、检测快速、分析精密度高、结果准确度好等优点，适合测定制剂中的有效成分的含量，资料中有关采用高效液相色谱法测定制剂中主要成分含量的文献较多。 银杏叶中（又名白果叶）的主要成分比较复杂，其中主要的有黄酮苷、贴内之类、芸香甙、山柰素-3-鼠李糖葡萄糖甙、山柰素、槲皮素、异鼠李素等成分。而银杏叶中的黄酮类化合物则是由黄酮及其苷、双黄酮、儿茶三种组成的。这其中的黄酮及苷类则是由山奈素、槲皮素及异鼠里素组成的，本方案拟采用高效液相色谱法对银杏叶分散片中总黄酮醇苷的含量进行测定，同时为今后的学习和研究奠定理论和实践上的基础。 三、设计方案 （一）仪器与试药 1.仪器 此次检测是以2487紫外检测器、美国生产Waters高效液相色谱仪和515液相色谱泵进行试剂的检测和勘察。通过高效液相色谱仪结合色谱进行检测。该方法采用了灵敏度较高的仪器，通过微粒子定相分析速度、分离技能及灵敏度等情况，从而达到检测的真正目的，这种方式不仅简单且检测结果又非常准确。 2.试药 表1：普通银杏叶分散片 名称 生产厂家 国药准字 批号 银杏分散片（一） 北京某制药有限公司 131105 银杏分散片（二） 吉林某药业有限公司 141009 3.试剂 为深入研究银杏叶分散片中总黄酮醇苷的含量，通过三个步骤进行总黄酮醇苷的含量的测量，其中第一部分是提取银杏叶分散片并将其研制成粉末状；第二部分是分别加入不同的-25℃甲醇和4:1的盐酸溶液混合液体，并通过不同的浓度、流速进行研究对比；第三部分是稀释对比，测量银杏叶分散片中总黄酮醇苷的含量，并分析达到何速度、何浓度可完全使其溶解，具体见图1。 图1：银杏叶分散片中总黄酮醇苷的含量测量过程 结合上图的内容，通过银杏叶中总黄酮醇苷的提取，充分利用甲醇超声对银杏叶中总黄酮醇苷的提取，其中加入25%甲醇和盐酸溶液以4：1混合溶液，并利用加热、回流法和盐酸加热水解法这三方式进行提取，经试验结果表明，液体加热和回流的方式对黄酮醇苷类成分的提取会更好一些。 （二）检测条件 1.流动相：甲醇-0.4%磷酸溶液（1:1） 2.检测波长：360nm 3.柱温：30℃ 4.色谱柱：WatersNova-pakC18(5μm，3.9mm×150mm) 5.流速：流速1.0ml/min （三）溶液的制备 1.供试品溶液的制备 取银杏叶分散片适量，研细，取约0.5g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇溶液25ml，密塞，称定重量，加热回流1小时，放冷至室温，再称定锥形瓶及溶液的重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，溶液经滤纸滤过，取续滤液，即得银杏叶供试品溶液，待用。 2.对照品溶液的制备 称取槲皮素对照品约50mg至50mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，制成质量浓度约为1mg/mL对照品储备液,代用。含量测定时，可加甲醇分别稀释至25μg/mL和20μg/mL。 3.混合对照品溶液 精密称取槲皮素15.78mg、山柰酚10.87mg，置同一10mL量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，制成槲皮素、山柰酚混合储备液；异鼠