参苓白术散中人参皂苷的含量测定方案.pdfVIP

参苓白术散中人参皂苷的含量测定方案 一、设计背景 参苓白术散是一种中成药，其主要成分是人参、白扁豆、白术、茯苓、甘草、桔梗、 莲子、砂仁、山药、薏苡仁。参苓白术散具有补脾胃、益肺气，用于脾胃虚弱、食少便溏， 气短咳嗽，肢倦乏力。现代药理学认为参苓白术散主要具有调节肠胃运动和改善代谢的作 用。调节肠胃运动：小剂量参苓白术散对肠管具有兴奋作用，能够解除肾上腺素对于肠管 的部分抑制作用，大剂量的参苓白术散则能够抑制肠管的收缩，并且能够拮抗氯化钡和毛 果云香碱所导致的肠管收缩，能够增加肠管对于水和氯离子的吸收。改善代谢的作用：参 苓白术散治疗脾气虚的肠道疾病， （包括：慢性胃炎、慢性结肠炎、胃溃疡、十二指肠溃 疡等），治疗前患者尿液中的肌酐、尿素氮、尿酸值明显低于正常值，治疗后这些指标显 著升高，并且对于患者的免疫功能和血液流变学指标具有明显的改善作用。参苓白术散配 方中的君药是人参，人参的主要检测成分是人参皂苷，本设计采用高效液相色谱法检测参 苓白术散中人参皂苷含量。 二、设计依据 根据 《中国药典》 （2020 版）的规定，对于药品中的人参皂苷 （包括：Rg 、Re、 1 Rb ）含量的检测需采用高效液相色谱仪进行分离和检测。 1 在方剂的定量检测工作中，对于人参的主要检测成分是人参皂苷，茯苓的主要检测成 分是茯苓聚糖，对于白术的检测，其主要检测成分是挥发油，对于白扁豆的检测，其主要 检测成分是总磷脂，对于薏苡仁的检测，其主要检测成分是薏苡仁酯。目前对于人参皂苷 的检测方法最为成熟，人参皂苷最常检测的是Rg 、Re、Rb 三种，本设计选择对于参苓 1 1 白术散中Rg 、Rb 进行检测。对于人参皂苷的检测，目前具有可见-紫外分光光度法、薄 1 1 层扫描法、高效液相色谱法，可见-紫外分光光度法只能检测总皂苷的含量，薄层扫描法 其操作步骤较为繁琐，且容易受到反应时间、反应温度等外界条件的影响。相比之下，高 效液相色谱法其分离系统较为封闭，检测过程受外界环境的影响较小，操作步骤比较简单， 重复性好。 三、设计方案 （一）仪器与试剂 试剂：乙腈 （品牌：阿拉丁，纯度：色谱纯）、甲醇 （品牌：阿拉丁，纯度：色谱纯）、 氯仿 （品牌：南京昊绿，纯度：分析纯）、正丁醇 （品牌：国药集团，纯度：分析纯）、 人参皂苷Rg 、Rb 标准物质 （品牌：阿拉丁）。 1 1 仪器：高效液相色谱仪 （品牌：安捷伦，型号：Angilent1260）、C18色谱柱 （品牌： 安捷伦）、紫外可见检测器 （品牌：安捷伦）、电子天平 （品牌：奥豪斯，精确度：0.0001g）。 材料：采购市售各类品牌的参苓白术散 10批次。 （二）实验方法 1.标准溶液和样品溶液的配制 采用电子天平 （精确到0.0001）准确称取人参皂苷Rg 人参皂苷Rb 标准物质，分 1 1 、 别采用甲醇溶解配制成为浓度为0.3mg/mL 的标准溶液。准确称取参苓白术散样品大约 5g，加氯仿20mL，进行加热回流，经1h 后冷却过滤，并且采用10mL 的氯仿对药渣进 行洗涤，将氯仿液弃去。保留药渣，经一段时间将氯仿全部挥发掉以后，加入30mL 的甲 醇，进行加热回流，经2h 加热回流后进行放冷后过滤，再往药渣中加入甲醇20mL，经 1h 的加热回流，进行放冷后过滤，采用甲醇 10mL进行残渣的清洗并过滤，合并绿叶回 收甲醇。回收剩余物用水进行3次冲洗，收集洗液，随后往洗液中加入浓度为3%的氨水， 再加饱和正丁醇进行重复4 次的提取，合并正丁醇提取液，蒸发干后分次加入甲醇溶液， 将溶液定量转移到容量瓶，并稀释到刻度后混匀。 2. 色谱工作条件 流动相：乙腈和水，梯度洗脱 （0min，15%乙腈；15min，40%乙腈；17min，15%乙 腈），流动相流速：1mL/min，柱温：35摄氏度，检测波长为203纳米，进样量为1