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牛黄解毒片的质量检测方案设计 一、设计背景 牛黄解毒片为经典的传统复方，其主要功效为清热解毒，主治火热内盛引起的口腔溃 疡、目赤肿痛、咽喉肿痛等症，在临床上有良好的疗效。其应用广泛，价格便宜，人们往 往将其作为一种家庭常备中药。2020年颁布的 《中国药典》中牛黄解毒片由八味中药组 合而成，分别为人工牛黄、黄芩、大黄、桔梗、石膏、冰片、甘草、雄黄。 原标准的含量测定项仅对黄芩中黄芩苷的含量进行了测定，而没有对方中用量最大的 大黄进行含量测定。大黄素是大黄的主要活性成分，具有良好的抗微生物、抗炎、抗肿瘤 活性和免疫抑制等作用，与牛黄解毒片的功效主治接近。所以为了测定牛黄解毒片中的大 黄素含量，建立了高效液相色谱的分析方法。 图1 大黄素的分子结构式 二、设计依据 参照《中国药典》收载的大黄药材中大黄素的含量测定方法，来确定牛黄解毒片中大 黄素含量测定的色谱条件和供试品制备方法。色谱采用HP1100型系列高效液相色谱仪， 色谱柱为HYPERS ODS2型色谱柱。检测波长为289nm。 三、设计方案 （一）仪器与材料 1.仪器 水浴锅、电子天平、超声机、高效液相色谱仪 （岛津）、25ml容量瓶、1ml刻度吸管、 加热回流装置、研钵。 2.材料 大黄素对照品(中国食品药品检定研究院)，牛黄解毒片（自制）、甲醇为色谱纯、0.1% 甲酸、0.1%磷酸、三氯甲烷为分析纯。 （二）测定方法 1.流动相的选择 根据文献的报道，尝试甲醇-0.1%磷酸溶液 （85 ∶15）与甲醇-0. 1%甲酸(85 ∶15)分 别为流动相。经实验确定流动相的优劣，以出峰的保留时间和峰形，确保大黄素与相邻峰 可以完全分离，以此为标准确定最终的流动相组成。 2.检测波长的选择 根据文献的报道，选择289nm作为检测波长。 3.对照品溶液的配制 精密称取10mg大黄素对照品，25ml容量瓶中用甲醇定容，摇匀。再精密移取1ml该 溶液，转移至25ml容量瓶中再次定容，摇匀。 4.供试品溶液的配制 取牛黄解毒片20片，精密称定，记录总重。倒入研钵中研磨到细粉状，精密称取粉末 约0.5g，置具塞瓶中，加入甲醇25ml，加热回流30分钟，放冷至室温，滤过，滤液置25ml 容量瓶中，用少量甲醇洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中。量取滤液5.0ml，置磁蒸 发皿中挥去溶剂，加三氯甲烷，加热回流，放冷至室温，分液。减压回收溶剂。最后加甲 醇至10ml刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 5. 自制牛黄解毒片 人工牛黄、黄芩各20g，大黄160g，桔梗、石膏、冰片各20g，甘草、雄黄。各20g 以上药品，择净晾干，加水煎煮3次，过滤。3液合并放冷，搅匀，灌装，蒸干，密封， 消毒，即得。 6.阴性供试品溶液的配制 取缺大黄的其他药材，按自制牛黄解毒片工艺及4.供试品溶液的制备方法制成缺大 黄的阴性供试品溶液。 7.阴性干扰实验 精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各20μl，注入高效液相色谱 仪测定结果应使大黄素相应保留时间处无干扰峰。 8. 色谱条件的确定与专属性实验 色谱柱：HYPERS ODS2。 柱温：25℃。 进样室温度：室温； 进样体积：20μl。 记录大黄素的保留时间和峰形，计算分离度，判定是否可以达到良好的分离效果。 表1 专属性实验结果 物质名称 保留时间 （min） 分离度 大黄素 大黄酚 大黄酸 9.线性关系的确定 分别精密称取大黄素的对照品溶液0.5，0.25，0.1，0.05，0.025ml，用稀释液定容 至10ml的容量瓶之中，取适量摇匀，微孔滤膜过滤，分别进样20微升，以各对照品溶液 的浓度 （mg/ml）为横坐标，以对照品峰面积为纵坐标，绘制大黄素的标准曲线。将大黄 素的回归方程、相关系数、和线性范围列至表2。同时在信噪比 （S/N）为10和3时的浓 度为定量限和检出限。 表2 大黄素的回归方程，相