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关于戊己水煎液对幽门螺杆菌诱导SGC7901细胞分泌白细胞介素8的作用 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：关于戊己水煎液对幽门螺杆菌诱导SGC7901细胞分泌白细胞介素8的作用 1 1 实验材料 2 2 实验方法 3 3 结果 4 4 讨论 4 文2：关于siRNA对胃腺癌细胞株SGC7901血管内皮生长因子基因表达的作用 6 1 材料和方法 7 2 结果 9 3 讨论 10 参考文摘引言： 12 原创性声明（模板） 13 文章致谢（模板） 13 正文 关于戊己水煎液对幽门螺杆菌诱导SGC7901细胞分泌白细胞介素8的作用 文1：关于戊己水煎液对幽门螺杆菌诱导SGC7901细胞分泌白细胞介素8的作用 自1983年澳大利亚学者分离和培养H·pylori以来，人类对H·pylori与胃黏膜疾病的关系进行了广泛深入的研究。一系列研究结果表明，H·pylori是慢性活动性胃炎的主要致病因素[1-2]，其引起的炎症反应是致病机制之一[3]。我国属H·pylori的高感染区，由于化学药物和抗生素的应用，产生了大量的耐药菌株。因此，许多学者从中药中寻求解决的办法。近几年研究显示，运用中药体内外抗H·pylori均有明显的优势，存在很大的潜力。 中药经方戊己丸(《太平惠民和剂局方》)是传统治疗胃部疾患的良好方剂。在治疗慢性胃炎、消化性溃疡的临床观察中，其疗效早有报道，但是治疗机理尚不十分清楚。本实验欲从体外探讨戊己丸对H·pylori感染性胃部疾患的作用机理。现报道如下。 1 实验材料 菌株和细胞 H·pylori采用国际标准菌株SS1 (sydney strain 1)，该菌株含有细胞空泡毒素(VacA)和细胞毒素相关基因(CagA)。人胃上皮细胞系SGC-7901细胞引自中南大学湘雅医学院细胞实验中心。 药物 戊己水煎液成分取自戊己丸(由黄连、吴茱萸、白芍等比例组成)，湖南中医药大学药学院植物药化学分析研究室与药物制剂研究室制备(浓度1 g/mL)。抗生素混合液(万古霉素10 mg/L，两性酶素B 2 mg/L，多粘菌素B mg/L)自配。 试剂 空肠弯曲菌琼脂基础(上海腹泻病控制上海试剂供应研究中心)，RPMI 1640培养液(美国GIBCO公司)，小牛血清(杭州四季青生物制品有限公司)，白细胞介素-8(IL-8)试剂盒(上海森雄科技实业有限公司)。胰蛋白酶、DMSO(美国Difco公司)，蛋白质试剂盒(美国Sigma公司) 仪器 WMZK-02型厌氧培养箱，浙江义乌冷冻机总厂；X-SB-1A型倒置显微镜，广西梧州光学仪器厂；3111型CO2水套培养箱，美国FORMA公司；TECAN SUNRISE型酶标分析仪，奥地利。 2 实验方法 H·pylori的活化 取 mL冻融的H·pylori菌置于改良Skirrow琼脂培养基平板上，涂布均匀，于37 ℃微需氧环境(N2 85%，CO2 10%， O2 5%)培养72 h。 细胞培养 SGC-7901细胞用含20%小牛血清的RPMI 1640培养液进行培养，转种时调整细胞的密度(1×105个/mL) 白细胞介素-8的测定 利用Huang 等[4-5]方法进行。将SGC-7901细胞(1×105/mL)加入24孔培养板中，用RPMI 1640完全培基培养(含20%小牛血清，加双抗)，48 h后用Hank’s液清洗细胞2次；感染H·pylori：调整H·pylori的浓度，使细胞孔中细菌浓度分别为1×104、1×105、1×106、1×107 CFU/mL，加入细胞培养孔，4 mL/孔。37 ℃，微需氧环境培养24 h。取出细胞离心，收集上清，用ELISA法测IL-8(按照说明书严格操作)，492 nm处测得OD值，按照标准曲线得出IL-8的浓度。最后确定H·pylori对SGC-7901细胞的最佳感染浓度。测出感染H·pylori的SGC-7901细胞中IL-8的含量，选择IL-8含量最高的H·pylori浓度作为感染培养细胞的浓度，然后观察药物在不同浓度(1︰160、1︰320、1︰640、1︰1280)下对H·pylori的抑制作用及对IL-8含量的影响。 统计学方法 测得指标均用x±s表示，采用进行统计分析。 3 结果 (见表1、表2)表1 不同浓度H·pylori对IL-8含量的影响(略)注：与1×104组比较，*P 4 讨论 本实验用的H·pylori为标准菌株SS1，结果证实，该菌可以刺激SGC-7901细胞分泌IL-8；将中药戊己水煎液加入感染H·pylori的细胞中，发现该药对H·pylori感染的SGC-7901细胞所分泌IL-8的含量明