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天蓝苜蓿黄酮组分的制备及清除DPPH自由基活性研究 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：天蓝苜蓿黄酮组分的制备及清除DPPH自由基活性研究 1 1 仪器与材料 2 2 方法 3 22 聚酰胺色谱柱分离天蓝苜蓿黄酮组分 3 23 天蓝苜蓿乙醇提取物黄酮组分含量测定 4 24 清除DPPH自由基自由基活性的测定方法 5 3 结果 6 4 讨论 7 文2：迷迭香水溶性成分清除OH自由基活性研究 8 1 试剂及仪器 9 2 方法 9 3 结果 10 4 讨论 10 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 12 正文 天蓝苜蓿黄酮组分的制备及清除DPPH自由基活性研究 文1：天蓝苜蓿黄酮组分的制备及清除DPPH自由基活性研究 天蓝苜蓿（Medicago lupulina L）为豆科苜蓿属（Medicago）植物的茎叶或地上部分，广泛分布于东北、华北、西北、华中和西南各地；夏、秋采收，洗净晒干备用。其味甘、微涩、性平；具有清热利湿，凉血止血，舒经活络功效；主治黄疸型肝炎[1]。常见的苜蓿有紫花苜蓿、天蓝苜蓿、南方苜蓿。研究表明，紫花苜蓿主要含有黄酮类、多糖类、香豆素类等化合物；具有抗氧化、抗衰老、调节免疫、降血脂等作用[2-4]，但对同科植物天蓝苜蓿的药理作用研究未见报道。实验以聚酰胺色谱柱分离天蓝苜蓿中黄酮组分，研究其清除DPPH自由基能力。 1 仪器与材料 11 仪器 6GU -50k多功能动态热回流提取浓缩机组（上海矩源机械设备有限公司）；RE-52AA旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；HH-S26S恒温水浴锅（金坛大地自动仪器厂）；HP-8453紫外分光光度计（美国惠普公司）；LyoQuest-55plus冷冻干燥（西班牙Telster）；BPZ6033LC真空干燥箱（上海-恒科技有限公司）；YC1800喷雾干燥（上海雅程仪器设备有限公司）；BP2010S电子天平（德国Sartorius公司）；SpectraMax i3 全自动荧光酶标仪（美国Molecular公司） 12 材料 天蓝苜蓿于2015年7月采自甘肃省平凉市崆峒区，由甘肃中医药大学药学院中药鉴定教研室杨扶德教授鉴定为豆科苜蓿属天蓝苜蓿（Medicago lupulina L）地上部分。聚酰胺（20～40目，批号：，浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂）；95%乙醇（批号：，甘肃润康药业有限公司制造）；无水甲醇（批号：，利安隆博华医药化学有限公司）；三氯化铝（批号：HG3-927-76，天津市化学试剂厂）；芦丁对照品（批号：100080-20070，中国药品生物制品检定所）；DPPH试剂2，2-二苯基苦味酰基苯肼基自由基，（Sigma-Ald rich公司，批号：D9132-1G）；维生素C（Sigma-Ald rich公司，批号：A92902-25G）；二甲基亚砜（批号：100208，科昊生物工程有限责任公司） 2 方法 21 天蓝苜蓿乙醇提取物的制备 称取1500 g天蓝苜蓿装入多功能动态热回流提取浓缩机组的提取罐中，加5倍70%乙醇浸泡05h，以10、10、8倍70%乙醇70℃回流提取三次，每次1h，合并三次回流提取液，减压回收乙醇得浓浸膏，60℃真空干燥得天蓝苜蓿乙醇提取物，得率为326%，即每克干浸膏相当于307g生药材。 22 聚酰胺色谱柱分离天蓝苜蓿黄酮组分 221 聚酰胺吸附剂的预处理 20～40目筛选聚酰胺吸附剂颗粒1000g，用95%乙醇浸润及浸泡过夜（≥12h），然后用大量蒸馏水洗去乙醇，装入玻璃层析柱，用蒸馏水冲洗密集后进行上样。 222 聚酰胺色谱柱的动态吸附及解吸 取适量天蓝苜蓿乙醇提取物，加蒸馏水溶解成01g/mL天蓝苜蓿提取物上样母液。上样速度：12mL/min，每收集200mL为1份，取流出液用紫外分光光度计进行扫描，测263nm波长处紫外吸光度值（A）。流出液与上样母液图谱相似时即为饱和，停止上样。相继用蒸馏水、30%、60%和90%乙醇进行洗脱（洗脱速度：18mL/min，同上，用紫外分光光度计进行扫描，在263、364nm波长处紫外吸光度值（A），洗脱曲线近似平直时为终点。以紫外吸光度值（A）和洗脱液体积，制作吸附曲线与洗脱曲线。 223 不同乙醇浓度天蓝苜蓿黄酮组分制备 将222所述方法得到的水洗脱液进行喷雾干燥（风速：25m，进样速度15mL/min），减压回收30%、60%、90%洗脱液，浓缩至一定体积，冷冻干燥。得水洗脱物、30%、60%、90%乙醇洗脱物，得率分别是55%、787%、762%、1362%（55g、787g、762g、1365g） 23 天