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脂肪源性干细胞向成纤维细胞分化研究 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：脂肪源性干细胞向成纤维细胞分化研究 2 一、材料和方法 2 1. 实验材料 2 2. 大鼠ADSCs的分离培养及原代细胞观察 3 3. ADSCs的鉴定 3 4. ADSCs向成纤维细胞诱导分化的形态观察 4 5. MTT比色法测定诱导后细胞活性 4 6. 扫描电子显微镜观察诱导后细胞形态 5 7. 免疫细胞化学染色检测诱导后细胞波形蛋白的表达 5 8. 统计学分析 5 二、结果 5 1. ADSCs生长情况及组织学观察 5 2. ADSCs的鉴定 6 3. ADSCs经诱导分化后不同时间点细胞形态变化 6 4. MTT法检测不同时间点诱导细胞活性变化 6 5. 扫描电子显微镜观察诱导细胞形态 7 6. 免疫细胞化学染色检测诱导后细胞波形蛋白表达 7 三、讨论 7 文2：纤维增强型中空纤维膜研究成果综述 9 1 连续纤维增强型中空纤维膜 10 2 编织管增强型中空纤维膜 12 3 多孔基膜增强型中空纤维膜 15 4 结 语 17 参考文摘引言： 18 原创性声明（模板） 19 文章致谢（模板） 19 正文 脂肪源性干细胞向成纤维细胞分化研究 文1：脂肪源性干细胞向成纤维细胞分化研究 成纤维细胞是真皮的主要群体，提供皮肤的韧性和弹性，而皮肤的伤口愈合则是由成纤维细胞通过沉积暂时性的组织基质而启动[1，2];还可通过功能性物质(如胶原蛋白、生长因子)的分泌以调节各种细胞的增殖与功能;此外，成纤维细胞对于皮肤重塑和急性伤口收缩也很重要，故在皮肤再生修复过程中发挥关键作用，被认为是组织工程皮肤理想的种子细胞[3]。但成纤维细胞应用到临床时会受到限制，比如自体来源的成纤维细胞需要牺牲相对次要的正常皮肤进行提取，不但数量有限，还会留下新的创面;而异体来源的成纤维细胞则存在免疫排斥。 干细胞具有自我更新能力和多向分化潜能，因此，本研究致力于应用脂肪源性干细胞(adiposederivedstemcells，ADSCs)向成纤维细胞分化，为组织工程皮肤种子细胞的来源提供科学合理的解决途径，也为分化而来的成纤维细胞在体内功能的深入研究及临床应用提供必要的基础研究。 一、材料和方法 1. 实验材料 健康清洁级SD大鼠10只，280～320g，雌雄不限，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，动物合格证号:SCXK(湘)2016-0002。主要试剂及仪器:L-DMEM培养基(Sigma公司)，FBS(HyClone公司)，Ⅰ型胶原酶(Sigma公司)，胰蛋白酶(Sigma公司)，β-甘油磷酸钠(Sigma公司)，异丁基甲基黄嘌呤(Sigma公司)，吲哚美辛(Sigma公司)，CD90-FITC和CD45-FITC(Abcam公司)，兔抗大鼠波形蛋白抗体及ABC免疫组织化学试剂盒(Boster公司);德国Heraues培养箱，HD-850型无菌工作台(杭州艾普仪器设备有限公司)，流式细胞仪(HeilnaTradeGmbH公司)，日本JSM-T300型扫描电子显微镜，5-5R低速冷冻离心机(湖南恒诺仪器设备有限公司)，BH8102-F恒温浴槽(杭州保恒恒温技术有限公司) 2. 大鼠ADSCs的分离培养及原代细胞观察 %戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠(30mg/kg)，8%硫化钠脱毛，碘伏消毒，腹股沟处获取脂肪，PBS冲洗，剪碎组织，再加入%Ⅰ型胶原酶，37℃消化50～70min，加入含10%FBS的L-DMEM培养基终止消化，200目滤网过滤，1500min离心10min，弃上清后获得细胞沉淀。加入L-DMEM培养基悬浮细胞后接种至培养瓶，定期换液，适时传代;扫描电子显微镜下观察记录原代细胞生长特点。 3. ADSCs的鉴定 成骨分化: 取第3代ADSCs，%胰蛋白酶消化，吸管吹打制备悬浮细胞，接种于放置细胞爬片专用玻片的6孔板中，置入37℃、5%CO2培养箱内培养;当细胞达80%～90%汇合时，进行成骨细胞诱导分化。吸除基础培养液，PBS冲洗，实验组加入成骨细胞诱导液(基础培养液+10-7mol/L地塞米松+5mg/L维生素C+10mmol/Lβ-甘油磷酸钠)，对照组用基础培养液;每2d换液，诱导期间，倒置显微镜下观察细胞变化;取成骨诱导后第16天和第23天的细胞，钙钴法检测碱性磷酸酶(alkalinephosphatase，ALP)，茜素红染色检测矿化结节。 成脂肪细胞分化: 取第3代ADSCs，%胰蛋白酶消化，吸管吹打制备悬浮细胞，接种于放置细胞爬片的专用玻片的6孔板中，置入37℃、