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姜科植物中蛋白遗传多样性的研究分析 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：姜科植物中蛋白遗传多样性的研究分析 1 1、材料与方法 2 三氯乙酸(TCA)/丙酮法。 3 2、结果与分析 4 3、结论与讨论 6 文2：薄荷属植物遗传多样性的ISSR分析 7 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 11 正文 姜科植物中蛋白遗传多样性的研究分析 文1：姜科植物中蛋白遗传多样性的研究分析 姜科(Zingiberaceae)是单子叶植物中的一个大科，分为2个亚科4族52属，约1500种，主要分布于热带、亚热带地区[1]。在我国，姜科植物主要分布在西南部和东南部的一些省份，有20属、216种[2，3]。姜科植物拥有较长的药用历史，它的药效通常是解表散寒、理气健胃[4]。其中，包含很多常用药材如益智和砂仁，并以“四大南药”而著称[5]。姜科植物的化学成分中均含有挥发油成分，因此有比较芳香的气味，除此之外还含有黄酮类、甾体皂苷类和双苯庚烷类等[6，7，8] 姜科植物资源丰富，已有基于PCR扩增技术的分子标记如AFLP、ISSR、SRAP、ITS等研究姜科植物资源的遗传多样性[9，10，11，12]。目前关于姜科植物蛋白的遗传多样性研究尚未见报道，蛋白作为基因表达的直接稳定产物且受相关基因的严格调控，同样能在生化水平上反映遗传物质组成上的差异[13]。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS)具有变性蛋白质可溶解、泳动速度只与分子量大小相关、与蛋白所带电荷和形态无关等特点[14]，成为一种有效工具已经被广泛应用于解决植物分类、进化问题及品种和变种的鉴定等方面[15，16] 笔者通过优化蛋白提取方法，利用SDS电泳技术对7种姜科植物的蛋白进行研究分析，获得蛋白的电泳指纹图谱，拟从蛋白水平探讨姜科植物的遗传多样性，旨在为姜科植物资源的分类、进化问题研究及品种鉴定等提供理论依据。 1、材料与方法 材料 姜科植物样品均采集于中国医学科学院药用植物研究所(海南分所)，由郑希龙副研究员负责鉴定(表1)。采集后的叶片加液氮研磨，置于-80℃冰箱保存。 试验试剂。 植物蛋白提取试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司;考马斯亮蓝G-250购自北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司;BCA蛋白浓度测定试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司;其他试剂均为国产分析纯。 试验仪器。 PL602-S电子天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司);WD-9405B水平摇床(沃德生物医学仪器公司);Tanon-4100全自动数码凝胶图像分析系统(上海天能科技有限公司);DYY-12型电泳仪(北京市六一仪器厂);HHCP-01型二氧化碳培养箱(上海申贤恒温设备厂) 方法 三氯乙酸(TCA)/丙酮法。 TCA/丙酮法提取蛋白参照文献[17]。称取姜科植物叶片放入研钵中，迅速加液氮研磨成粉末状，将粉末转入10mL离心管中，加入6mL预冷的10%TCA/丙酮溶液，涡旋混匀，-20℃沉淀若干小时。4℃15000min离心20min，取上清液2mL转移至10mL离心管中，加入3倍体积的预冷丙酮，充分混匀。4℃12000min离心25min，弃掉上清液后，抽真空挥发丙酮浓缩成干粉，加入100μL的蛋白裂解液，使用超声波仪器使其溶解，得到蛋白液。 Tris-HCl法。 Tris-HCl法提取蛋白参照文献[17]。称取姜科植物叶片放入研钵中，加入其鲜重10%的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)粉末，加入液氮充分研磨成粉末。将粉末转移至10mL离心管中，加入其3倍蛋白提取缓冲液(68mmol/，%SDS，10%甘油和3%β-巯基乙醇)，振荡器振荡15min后4℃放置1h，充分溶解蛋白。4℃12000min离心25min，取上清液转移至10mL离心管中，加入6mL预冷的丙酮，充分混匀，放入-20℃冰箱，沉降蛋白2h，12000min离心15min。取沉淀蛋白，抽真空挥发丙酮浓缩成干粉，加入300μL电泳上样提取缓冲液(%/，10%甘油，5%β-巯基乙醇和%的蒸馏水)，使用超声波仪器溶解沉淀后，4℃12000min离心5min，取上清液备用。 试剂盒法。 称取的姜科植物叶片，加入其鲜重10%的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)粉末，用其3倍蛋白提取缓冲液(μL1mol/，5mL10%SDS，10mL甘油，5mLβ-巯基乙醇，蒸馏水)研磨粉碎后转移到离心管中，加入1mL的蛋白裂解液后振荡混匀放置30min(4℃)，且每隔5min左右就振荡一下，4℃12000min离心30min，取上清液备用。 聚丙烯酰胺电泳分析方法。 SDS采用12%的分离胶和5%的浓缩胶，点样量为10μL。在80V恒压下电泳1h后，调整电压120V