炎症环境下成纤维细胞生长因子21对人胰腺癌细胞迁移和侵袭的影响研究.docVIP

炎症环境下成纤维细胞生长因子21对人胰腺癌细胞迁移和侵袭的影响研究 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：炎症环境下成纤维细胞生长因子21对人胰腺癌细胞迁移和侵袭的影响研究 1 1、资料与方法 2 2、结果 5 3、讨论 7 文2：EGFR反义寡核苷酸对人视网膜神经胶质细胞迁移的影响 9 1材料和方法 10 参考文摘引言： 14 原创性声明（模板） 15 文章致谢（模板） 16 正文 炎症环境下成纤维细胞生长因子21对人胰腺癌细胞迁移和侵袭的影响研究 文1：炎症环境下成纤维细胞生长因子21对人胰腺癌细胞迁移和侵袭的影响研究 胰腺导管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma，PDAC)是一种高侵袭性、高致死性的消化系统常见恶性肿瘤。因其临床表现隐匿、病情进展迅速和对放化疗抵抗，患者的5年生存率极低，约为8%[1]。有研究提出:随着胰腺癌发生率的逐年增高，预计到2030年，胰腺癌将成为所有癌症相关死亡的第2大原因[2]。因此，探讨胰腺癌的发生、发展过程，了解其生长、侵袭和转移的机制，加强胰腺癌的预防和提高其治疗效果显得尤为重要。 胰腺炎症作为胰腺癌的重要风险因素[3]，使得胰腺癌的患病率明显增加[4]。更为重要的是，胰腺炎症的存在为胰腺癌的迁移和侵袭等恶性生物学行为提供了有利条件。一方面，炎症细胞产生的炎症介质可以通过激活胰腺癌的NF-κB、STAT3、COX-2等炎症信号通路促进细胞的增殖、上皮间质转变[5]以及新生血管的形成[6]等;另一方面，胰腺癌细胞炎症信号激活以后产生的炎症介质反过来也会招募更多的炎症细胞浸润。因此，炎症环境与胰腺癌细胞的相互作用使得胰腺癌快速增殖、侵袭和转移。 成纤维细胞生长因子21(fibroblast growth factor 21，FGF21)属于FGF家族非典型成员[7]。目前研究表明其在糖脂代谢[8，9]及抗炎抗氧化[10，11]中起着重要作用，并且几乎没有促进细胞有丝分裂的功能。研究发现FGF21在正常胰腺组织中呈高表达，其通过自分泌的方式对胰腺组织本身发挥着重要的生理作用。高脂饮食喂养的小鼠给予FGF21治疗后胰腺炎症减轻，胰腺癌的发生与发展受到抑制[11]，提示FGF21可以用于胰腺癌的预防或治疗，但作用机制不清楚。当胰腺炎症发生时，FGF21表达迅速升高以减少胰腺的炎症反应。研究证实FGF21对炎症中胰腺组织的炎症因子的产生和炎症信号的激活起着抑制作用[12]。既然炎症与胰腺癌的关系密切，而FGF21又能显著抑制胰腺本身的炎症反应，我们据此推测:FGF21可能通过抑制胰腺组织的炎症而阻止胰腺癌细胞的恶性生物学行为。为此，本课题组观察FGF21在胰腺组织及胰腺癌中的表达及其对炎症环境下胰腺癌细胞迁移和侵袭的影响，探讨其作用机制是否与抑制胰腺癌细胞的炎性反应相关[13]，以期为临床上胰腺癌的治疗提供思路。 1、资料与方法 材料 收集重庆医科大学临床病理诊断中心2013年9月至2016年9月60例胰腺癌和55例正常胰腺组织的石蜡切片。纳入研究的患者均未进行放化疗，组织收集均经过患者和家属的知情同意，2016年12月通过重庆医科大学医学研究伦理委员会审查。 Capan-1和AsPC-1冻存于重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心。RNA提取和逆转录试剂盒购自日本TaKaRa公司。引物由上海生物工程技术服务有限公司合成。脂多糖(LPS)购自美国Sigma公司，成纤维细胞生长因子21(FGF21)购自以色列PROSPEC公司。免疫组化试剂盒购自福建迈新生物技术开发有限公司。兔抗MMP-9购自美国Selleck公司，鼠抗β-actin购自美国ABclonal公司。 方法 免疫组化染色步骤按照试剂盒说明书进行。抗FGF21抗体以1∶200稀释，4℃下孵育过夜。染色结果半定量分析按阳性细胞百分比结合着色强度综合评分。按照阳性细胞百分比评分:25%～50%为2分，50%～75%为3分，75%为4分。按照染色强度评分:不着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。然后两者的乘积评分如下:0～1为“-”，2～4为“+”，5～8为“++”，9～12为“+++”。免疫组化染色评分由2名病理科医师采用双盲法独立判定。 RT-qPCR检查 按照RNA提取试剂盒说明书从细胞中获得总RNA，将RNA逆转录成cDNA，分别进行FGF21、MMP-9、IL-6和β-actin的基因扩增。FGF21上游引物:5′-ATGGATCGCTCCACTTTGACC-3′，下游引物: 5′-GGGCTTCGGACTGGTAAACAT-3′，长度87 bp;MMP-9上游引物:5′-TGGGCTACGTG