土槿皮乙酸联合氟康唑对白念珠菌的抑菌效果研究.docVIP

土槿皮乙酸联合氟康唑对白念珠菌的抑菌效果研究 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：土槿皮乙酸联合氟康唑对白念珠菌的抑菌效果研究 1 1、材料和方法 2 2、结果 4 3、讨论 5 文2：聚乙烯亚胺单独及与三种抗菌药物联用对白念珠菌的体外抗菌活性 6 1 材料和方法 8 2 结果 9 3 讨论 10 参考文摘引言： 12 原创性声明（模板） 13 文章致谢（模板） 14 正文 土槿皮乙酸联合氟康唑对白念珠菌的抑菌效果研究 文1：土槿皮乙酸联合氟康唑对白念珠菌的抑菌效果研究 念珠菌是引起医院获得性血液感染的第四常见致病菌，严重威胁患者的生命健康，其感染的病死率为40%～50%[1，2，3]。尽管非白念珠菌的感染率逐年升高，白念珠菌仍是目前临床分离率最高的致病性念珠菌，在血流、尿道及阴道念珠菌感染中均占有较高比例，感染率分别为%、%及67%[2，4，5]。有研究结果表明，对临床常用唑类抗真菌药物耐药的白念珠菌逐渐增多，增加了治愈难度[6] 土槿皮乙酸是一种二萜酸，具有抗真菌、抗病毒及抗肿瘤的功效，为我国传统抗真菌药物土槿皮的主要活性成分。土槿皮酊被用于治疗真菌所致的皮肤癣症[7，8，9] 联合用药是临床应对耐药加剧的常用方法，在增强抗真菌药物疗效的同时，也可减少药物的不良反应。有些中药的天然活性成分可以显著增强耐药真菌对抗真菌药物的敏感性[10]。PAB单独作用抑制念珠菌的作用已得到证实。本研究拟探讨PAB联合氟康唑对白念珠菌的抑菌效果，为临床抗真菌治疗提供理论基础。 1、材料和方法 菌株来源 收集临床分离的白念珠菌33株，包括氟康唑耐药菌株12株和敏感菌株21株。质控菌株白念珠菌（ATCC22019）由上海交通大学附属瑞金医院馈赠。 药物与试剂 PAB（纯度98%，上海同田生物技术股份有限公司），氟康唑、沙保弱琼脂培养基（上海源聚生物科技有限公司），RPMI1640培养基（美国赛默飞公司），二甲基亚砜和4-吗啉丙磺酸（上海碧云天公司） 微量稀释法测定各单药最小抑菌浓度 参照美国临床实验室标准化协会M27-A3文件[11]，采用微量稀释法测定PAB及氟康唑对各菌株的MIC。药物以DMSO溶解后，经RPMI1640培养液倍比稀释，DMSO含量均低于1%。菌液调至103CFU/mL。反应在无菌96孔平底微量培养板中进行，每孔加103CFU/mL菌液100μL，加不同浓度药物100μL，于37℃恒温培养箱中培养24h，观察结果。PAB的终浓度为～256μg/mL，氟康唑的终浓度为～1024μg/mL。设置阴性对照（培养液200μL）及阳性对照（菌液100μL+培养液100μL） 棋盘式微量稀释法检测PAB与氟康唑联用的抑菌效果 药物用RPMI1640培养液倍比稀释，菌液调至103CFU/mL。于96孔板中加入100μL菌液，加入PAB及氟康唑各50μL。其中2种药物以二维棋盘的纵、横2个方向分别以2倍比稀释浓度加入。横向1～11孔加入不同浓度的氟康唑50μL，纵向A～H孔加入不同浓度的PAB50μL。PAB的终浓度为～16μg/mL，氟康唑的终浓度为～32μg/mL。每板均设阴性对照、阳性对照，置于37℃孵箱中培养24h，观察结果。药物体外相互作用方式以部分抑菌浓度指数判定。当FICI≤时，表明2种药物联用的抑菌效果为协同作用；时，为拮抗作用。 时间-杀菌曲线试验动态监测2种药物联用的抑菌效果 根据棋盘式微量稀释法的结果，采用时间-杀菌曲线试验动态监测2种药物联用对菌株A的抑菌效果。菌液初始浓度为103CFU/mL，药物浓度选择2种药物联用时的MIC。设置对照组（仅含菌液）、PAB组（菌液+2μg/mLPAB）、氟康唑组（菌液+16μg/mL氟康唑）、两药联用组（菌液+16μg/mL氟康唑+2μg/mLPAB）。37℃、120min恒温震荡培养12、24和48h后，用%无菌氯化钠溶液进行10倍系列稀释，取一定量菌液涂布于沙保弱平板，37℃恒温箱中培养24h，进行菌落计数。同时于培养48h时取原倍菌液20μL充池快速计数板，高倍镜下观察菌株生长状态。以lgCFU/mL为纵坐标、时间为横坐标，绘制时间-杀菌曲线（CFU=菌落数×稀释倍数）。药物作用24h时，与2种药物中单用抗真菌活性最强者相比，若2种药物联用后抗真菌活性的增强≥2lgCFU/mL，则确认2种药物联用具有协同作用。 统计学方法 采用软件进行统计分析。计数资料以率表示，组间比较采用χ2检验。以P为差异有统计学意义。 2、结果 与氟康唑单独使用的抑菌效果 根据CLSIM27-A3文件，采用微量稀释法检测PAB及氟康唑单独使用时对白念珠菌的抑菌情况。结果表明，33株白念珠菌